碧云天生產(chǎn)的Myco-Zero?支原體去除試劑，英文名稱(chēng)為Myco-Zero? Mycoplasma Removal Agent (MRA)或Myco-Zero? Mycoplasma Elimination Reagent，簡(jiǎn)稱(chēng)Myco-Zero?，是一種用于快速、高效去除細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中廣泛存在的支原體污染的非抗生素類(lèi)試劑。本產(chǎn)品是一種真正能 去除、殺滅支原體的試劑，去除后即可撤去，無(wú)須長(zhǎng)期維持，適合各種被支原體污染細(xì)胞、病毒及相關(guān)試劑的處理，特別適合被支原體污染的珍貴細(xì)胞或已污染支原體但需要保種細(xì)胞的支原體去除。本產(chǎn)品與Minerva Biolabs公司的Mynox?為同類(lèi)產(chǎn)品，效果基本一致。

支原體(Mycoplasma)是最小、 的原核生物。支原體有如下特征：支原體無(wú)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，所以針對(duì)細(xì)胞壁的許多常見(jiàn)的抗生素，如青霉素或β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素對(duì)支原體無(wú)效；支原體大小介于細(xì)菌和病毒之間，約為0.2-0.8μm，所以部分支原體可通過(guò)0.22μm濾器，常規(guī)的過(guò)濾對(duì)支原體無(wú)效；很多支原體由于自身的生物合成能力有限而依靠宿主提供營(yíng)養(yǎng)，所以通常吸附或散落在細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。支原體的這些特征使細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中存在支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)，細(xì)胞的支原體污染已經(jīng)成為一個(gè) 性的普遍問(wèn)題。支原體污染可能會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞的狀態(tài)，使細(xì)胞的基因表達(dá)、代謝特征發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)減緩、分化和死亡異常，嚴(yán)重影響細(xì)胞功能。這些影響因素會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、可重復(fù)性和一致性，因此去除支原體污染非常重要[1]。

本產(chǎn)品可快速、高效的清除細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)的支原體， 效率近 。市售的支原體清除試劑大多是四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和喹諾酮類(lèi)抗生素，它們主要是對(duì)支原體產(chǎn)生抑制作用，并非直接殺死支原體，因此作用比較慢且效果不能持久[2-4]。本產(chǎn)品主要成分是一種多肽類(lèi)表面活性劑，源自枯草桿菌發(fā)酵后的提取物?；谖⑸锏睦砘?，Myco-Zero?選擇性地與支原體膜特異性結(jié)合，改變支原體膜的通透性，從而導(dǎo)致支原體破裂死亡?；谠撎匦裕гw產(chǎn)生耐藥的可能性極低。本產(chǎn)品僅需使用一次、作用5-8天即可幾乎 有效地消除培養(yǎng)細(xì)胞中的支原體。清除支原體后，細(xì)胞可以立即恢復(fù)其自然形態(tài)和正常增殖速率。

本產(chǎn)品對(duì)被支原體污染的貼壁細(xì)胞HeLa和HCT-116、懸浮細(xì)胞MOLM-13和THP-1的支原體去除效果參見(jiàn)表1，經(jīng)碧云天的Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297) 檢測(cè)出的支原體陽(yáng)性細(xì)胞，用Myco-Zero?作用5-8天后，支原體再次檢測(cè)結(jié)果為陰性，轉(zhuǎn)陰后細(xì)胞狀態(tài)很穩(wěn)定，在傳代培養(yǎng)至數(shù)十代的過(guò)程中細(xì)胞支原體檢測(cè)始終呈陰性。支原體檢測(cè)陽(yáng)性的細(xì)胞轉(zhuǎn)陰時(shí)間與細(xì)胞種類(lèi)、細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量及支原體種類(lèi)、支原體污染嚴(yán)重程度等密切相關(guān)，表中數(shù)據(jù)僅供參考。

表1.碧云天Myco-Zero?支原體去除試劑(C0280)對(duì)支原體陽(yáng)性的HeLa、HCT-116、MOLM-13、THP-1細(xì)胞去除支原體污染前后的檢測(cè)數(shù)據(jù)示例。

注1：表中的1*、2*等數(shù)字代表細(xì)胞經(jīng)Myco-Zero?處理5-8天后的傳代次數(shù)。

注2：碧云天的Myco-Lumi?發(fā)光法支原體檢測(cè)試劑盒(低靈敏度儀器用) (C0297) 通過(guò)計(jì)算讀值B與A的比值來(lái)判斷是否有支原體污染。如果比值大于1.2表示有支原體污染，比值越大說(shuō)明污染程度越高，如果比值小于0.9說(shuō)明沒(méi)有支原體污染，如果比值介于0.9和1.2之間，建議原細(xì)胞(包含原培養(yǎng)液)繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時(shí)之后再測(cè)試一次。

本產(chǎn)品不含抗生素，不會(huì)使支原體發(fā)生耐藥反應(yīng)，細(xì)胞毒性小。本產(chǎn)品特異性地與支原體膜結(jié)合、通過(guò)改變支原體膜的通透性從而殺死支原體。盡管Myco-Zero?在作用期間可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)有一定的影響，但由于本產(chǎn)品不能穿過(guò)真核細(xì)胞的細(xì)胞膜，因此不會(huì)改變細(xì)胞的任何特性。支原體被清除后，細(xì)胞在后續(xù)的傳代過(guò)程中能快速恢復(fù)其正常的生長(zhǎng)和增殖狀態(tài)，細(xì)胞后續(xù)的生長(zhǎng)增殖幾乎無(wú)影響。本產(chǎn)品對(duì)細(xì)胞的增殖測(cè)試結(jié)果見(jiàn)圖1，Myco-Zero?在作用期間可能會(huì)抑制25-50%的細(xì)胞增殖，但是傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖均與正常的細(xì)胞無(wú)差異。