用途
該試劑盒用于體外定量檢測Mouse 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組TNF-α濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠TNF-α抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的小鼠TNF-α?xí)c包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？剐∈骉NF-α抗體與結(jié)合在包被抗體上的小鼠TNF-α結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，TNF-α濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中TNF-α的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 夾心法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時間 | 3.5h |
| 反應(yīng)性 | Mouse |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 7.81—500 pg/mL |
| 靈敏度 | 4.69 pg/mL |
| 樣本體積 | 100μL |
| 樣本類型 | 血清，血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的小鼠TNF-α，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|
| 500 | 2.59
2.61 | 2.6 | 2.536 |
| 250 | 1.716
1.756 | 1.736 | 1.672 |
| 125 | 1.047
1.037 | 1.042 | 0.978 |
| 62.5 | 0.555
0.557 | 0.556 | 0.492 |
| 31.25 | 0.303
0.287 | 0.295 | 0.231 |
| 15.63 | 0.19
0.164 | 0.177 | 0.113 |
| 7.81 | 0.114
0.126 | 0.12 | 0.056 |
| 0 | 0.061
0.067 | 0.064 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(pg/mL) | 23.99 | 59.60 | 188.68 | 25.90 | 59.84 | 172.83 |
Standard
deviation | 1.42 | 3.47 | 6.40 | 1.68 | 2.46 | 7.50 |
| C V (%) | 5.93 | 5.82 | 3.39 | 6.50 | 4.11 | 4.34 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 95-112 | 102 |
| EDTA plasma (n=8) | 94-112 | 102 |
| Cell culture media (n=8) | 93-107 | 100 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 92-105 | 89-103 | 92-106 |
| Average (%) | 98 | 95 | 99 |
| 1:4 | Range (%) | 93-110 | 90-105 | 90-102 |
| Average (%) | 100 | 96 | 96 |
| 1:8 | Range (%) | 91-105 | 89-105 | 92-109 |
| Average (%) | 97 | 97 | 100 |
| 1:16 | Range (%) | 86-101 | 87-99 | 91-104 |
| Average (%) | 93 | 94 | 98 |
注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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關(guān)鍵字： 小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α);Mouse TNF-α;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊和企業(yè)管理團(tuán)隊組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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