用途
該試劑盒用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中天然β-EP濃度。
檢測原理
本試劑盒采用競爭ELISA法。用小鼠β-EP抗原包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的小鼠β-EP與包被的小鼠β-EP競爭生物素標記的抗小鼠β-EP單抗上的結(jié)合位點，游離的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，小鼠β-EP濃度與OD450值之間呈反比，通過繪制標準曲線計算出樣品中小鼠β-EP的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 競爭法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時間 | 2.0h |
| 反應(yīng)性 | 小鼠 |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 15.63-1000 pg/mL |
| 靈敏度 | 9.38 pg/mL |
| 樣本體積 | 50μL |
| 樣本類型 | 血清、血漿或其他相關(guān)生物液體 |
特異性
可檢測樣本中的小鼠β-EP，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標準曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標準曲線。
| (pg/mL) | O.D | Average |
|---|
| 1000 | 0.386
0.44 | 0.413 |
| 500 | 0.533
0.543 | 0.538 |
| 250 | 0.765
0.729 | 0.747 |
| 125 | 1.042
1.052 | 1.047 |
| 62.5 | 1.417
1.387 | 1.402 |
| 31.25 | 1.74
1.726 | 1.733 |
| 15.63 | 1.979
1.987 | 1.983 |
| 0 | 2.327
2.333 | 2.33 |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| | Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(pg/mL) | 49.40 | 99.80 | 404.50 | 51.10 | 94.90 | 411.30 |
Standard
deviation | 2.90 | 5.50 | 14.20 | 3.20 | 5.40 | 14.80 |
| C V (%) | 5.87 | 5.51 | 3.51 | 6.26 | 5.69 | 3.60 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 89-105 | 96 |
| EDTA plasma (n=8) | 85-101 | 92 |
| Cell culture media (n=8) | 95-107 | 101 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
| | | Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 91-105 | 93-103 | 86-97 |
| Average (%) | 98 | 98 | 91 |
| 1:4 | Range (%) | 83-97 | 86-102 | 100-114 |
| Average (%) | 90 | 93 | 106 |
| 1:8 | Range (%) | 86-100 | 86-101 | 94-106 |
| Average (%) | 93 | 93 | 99 |
| 1:16 | Range (%) | 85-96 | 93-103 | 96-108 |
| Average (%) | 90 | 98 | 102 |
注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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關(guān)鍵字： 小鼠β-內(nèi)啡肽(β-EP)Elisa;Mouse β-EP;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗的專業(yè)技術(shù)團隊和企業(yè)管理團隊組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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致力于成長為我國重要的生命科學(xué)試劑和成果轉(zhuǎn)化一體化的領(lǐng)導(dǎo)者、致力于成為中國大型的科研試劑產(chǎn)品供應(yīng)商之一。