用途
該試劑盒用于體外定量檢測Human 血清，血漿或其他生物體液中天然及部分重組TLR4濃度
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人TLR4抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的人TLR4會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人TLR4抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素?？谷薚LR4抗體與結(jié)合在包被抗體上的人TLR4結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，TLR4濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中TLR4的濃度。
| 反應類型 | 夾心法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應時間 | 4.5h |
| 反應性 | Human |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 6.25—400 pg/mL |
| 靈敏度 | 3.75 pg/mL |
| 樣本體積 | 100μL |
| 樣本類型 | 血清，血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測樣本中的人TLR4，且與其它相關蛋白無明顯交叉反應。
重復性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實驗操作條件的不同（如操作者、移液技術、洗板技術和穩(wěn)定條件等），標準曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標準曲線。
| (pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
|---|
| 400 | 2.416
2.588 | 2.502 | 2.44 |
| 200 | 1.648
1.657 | 1.653 | 1.591 |
| 100 | 0.914
0.93 | 0.922 | 0.86 |
| 50 | 0.5
0.473 | 0.487 | 0.425 |
| 25 | 0.276
0.271 | 0.274 | 0.212 |
| 12.5 | 0.186
0.17 | 0.178 | 0.116 |
| 6.25 | 0.113
0.128 | 0.121 | 0.059 |
| 0 | 0.061
0.062 | 0.062 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(pg/mL) | 17.87 | 42.27 | 187.21 | 19.44 | 45.69 | 171.87 |
Standard
deviation | 0.94 | 2.10 | 8.50 | 1.13 | 2.06 | 9.25 |
| C V (%) | 5.26 | 4.97 | 4.54 | 5.81 | 4.51 | 5.38 |
回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 100-110 | 103 |
| EDTA plasma (n=8) | 98-111 | 104 |
| Cell culture media (n=8) | 87-98 | 92 |
線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 99-109 | 94-107 | 96-108 |
| Average (%) | 105 | 101 | 100 |
| 1:4 | Range (%) | 100-112 | 97-112 | 95-107 |
| Average (%) | 105 | 105 | 103 |
| 1:8 | Range (%) | 99-107 | 89-102 | 95-104 |
| Average (%) | 103 | 95 | 100 |
| 1:16 | Range (%) | 92-101 | 87-96 | 86-99 |
| Average (%) | 98 | 90 | 91 |
注意事項：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果
3、各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;
4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型!
關鍵字： 人Toll樣受體4(TLR4);人Toll樣受體4;Human TLR4;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗的專業(yè)技術團隊和企業(yè)管理團隊組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細胞、化學品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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