用途
該試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中天然Ang-Ⅱ濃度。
檢測原理
本試劑盒采用競爭ELISA法。用人Ang-Ⅱ抗原包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人Ang-Ⅱ與包被的人Ang-Ⅱ競爭生物素標(biāo)記的抗人Ang-Ⅱ單抗上的結(jié)合位點(diǎn)，游離的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，人Ang-Ⅱ濃度與OD450值之間呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中人Ang-Ⅱ的濃度。
| 反應(yīng)類型 | 競爭法 |
| 規(guī)格 | 96T |
| 反應(yīng)時(shí)間 | 2.0h |
| 反應(yīng)性 | 人 |
| 檢測方法 | Colormetric |
| 檢測范圍 | 31.25-2000 pg/mL |
| 靈敏度 | 18.75 pg/mL |
| 樣本體積 | 50μL |
| 樣本類型 | 血清、血漿或其他相關(guān)生物液體 |
特異性
可檢測樣本中的人Ang-Ⅱ，且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同（如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等），標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| (pg/mL) | O.D | Average |
|---|
| 2000 | 0.336
0.34 | 0.338 |
| 1000 | 0.413
0.447 | 0.43 |
| 500 | 0.619
0.585 | 0.602 |
| 250 | 0.892
0.896 | 0.894 |
| 125 | 1.313
1.307 | 1.31 |
| 62.5 | 1.785
1.771 | 1.778 |
| 31.25 | 2.175
2.191 | 2.183 |
| 0 | 2.79
2.796 | 2.793 |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。
| | Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean
(pg/mL) | 101.10 | 272.50 | 948.90 | 108.40 | 291.70 | 898.00 |
Standard
deviation | 6.70 | 14.40 | 43.60 | 6.60 | 14.60 | 44.00 |
| C V (%) | 6.63 | 5.28 | 4.59 | 6.09 | 5.01 | 4.90 |
回收率
分別往5個(gè)不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍和平均回收率。
| Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
|---|
| Serum (n=8) | 88-103 | 95 |
| EDTA plasma (n=8) | 95-107 | 101 |
| Cell culture media (n=8) | 91-105 | 96 |
線性
分別往5個(gè)樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白，做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。將5個(gè)樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實(shí)驗(yàn)，得出回收率范圍及平均回收率。
| | | Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
|---|
| 1:2 | Range (%) | 97-113 | 87-102 | 92-105 |
| Average (%) | 105 | 93 | 97 |
| 1:4 | Range (%) | 82-97 | 87-100 | 99-117 |
| Average (%) | 89 | 94 | 107 |
| 1:8 | Range (%) | 89-103 | 86-98 | 92-110 |
| Average (%) | 95 | 92 | 100 |
| 1:16 | Range (%) | 88-99 | 90-100 | 92-108 |
| Average (%) | 93 | 95 | 100 |
注意事項(xiàng)：
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣
4、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染
6、底物請避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號組分不得混用。
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2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
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關(guān)鍵字： 人血管緊張素ⅡElisa試劑盒;人血管緊張素Ⅱ;人血管緊張素Ⅱ(Ang-Ⅱ);Human Ang-Ⅱ ELISA;
湖北艾普蒂生物工程有限公司（簡稱：艾普蒂）由在國內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成，專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
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