用途
該試劑盒用于體外定量檢測(cè)Human 血清,血漿或其他生物體液中天然及部分重組ADAM8濃度
檢測(cè)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人ADAM8抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人ADAM8會(huì)與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人ADAM8抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素??谷薃DAM8抗體與結(jié)合在包被抗體上的人ADAM8結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,ADAM8濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中ADAM8的濃度。
反應(yīng)類型 | 夾心法 |
規(guī)格 | 96T |
反應(yīng)時(shí)間 | 3.5h |
反應(yīng)性 | Human |
檢測(cè)方法 | Colormetric |
檢測(cè)范圍 | 62.50—4000 pg/mL |
靈敏度 | 37.50 pg/mL |
樣本體積 | 100μL |
樣本類型 | 血清,血漿或其他生物體液 |
特異性
可檢測(cè)樣本中的人ADAM8,且與其它相關(guān)蛋白無明顯交叉反應(yīng)。
重復(fù)性
板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。
典型數(shù)據(jù)
由于實(shí)驗(yàn)操作條件的不同(如操作者、移液技術(shù)、洗板技術(shù)和穩(wěn)定條件等),標(biāo)準(zhǔn)曲線的OD值會(huì)有所差異。以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(pg/mL) | O.D | Average | Corrected |
---|
4000 | 2.373 2.393 | 2.383 | 2.295 |
2000 | 1.602 1.638 | 1.62 | 1.532 |
1000 | 0.934 0.914 | 0.924 | 0.836 |
500 | 0.482 0.518 | 0.5 | 0.412 |
250 | 0.277 0.251 | 0.264 | 0.176 |
125 | 0.187 0.179 | 0.183 | 0.095 |
62.50 | 0.132 0.142 | 0.137 | 0.049 |
0 | 0.08 0.096 | 0.086 | -- |
精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測(cè)20次。
板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測(cè)20次。
| Intra-assay Precision | Inter-assay Precision |
---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean (pg/mL) | 184.05 | 369.65 | 1809.55 | 194.66 | 341.91 | 1883.65 |
Standard deviation | 9.40 | 21.81 | 75.64 | 12.61 | 14.84 | 67.06 |
C V (%) | 5.11 | 5.90 | 4.18 | 6.48 | 4.34 | 3.56 |
回收率
分別往5個(gè)不同樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍和平均回收率。
Sample Type | Range (%) | Average Recovery (%) |
---|
Serum (n=8) | 85-99 | 91 |
EDTA plasma (n=8) | 85-97 | 91 |
Cell culture media (n=8) | 92-105 | 98 |
線性
分別往5個(gè)樣本中添加已知濃度的目標(biāo)蛋白,做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。將5個(gè)樣本分別稀釋2倍,4倍,8倍,16倍做回收實(shí)驗(yàn),得出回收率范圍及平均回收率。
|
| Serum (n=5) | EDTA plasma (n=5) | Cell culture media (n=5) |
---|
1:2 | Range (%) | 83-96 | 97-112 | 86-98 |
Average (%) | 90 | 105 | 92 |
1:4 | Range (%) | 89-105 | 86-102 | 81-94 |
Average (%) | 96 | 93 | 88 |
1:8 | Range (%) | 87-100 | 83-95 | 88-100 |
Average (%) | 94 | 88 | 93 |
1:16 | Range (%) | 92-105 | 86-100 | 88-103 |
Average (%) | 98 | 91 | 94 |
注意事項(xiàng):
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存
2、濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣
4、請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染
6、底物請(qǐng)避光保存。
7、嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理
9、.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
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關(guān)鍵字: 人 ADAM8 ELISA Kit;人解整合素金屬蛋白酶8(ADAM8);人 ADAM8 ELISA KIT;
湖北艾普蒂生物工程有限公司(簡(jiǎn)稱:艾普蒂)由在國(guó)內(nèi)科研試劑領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和企業(yè)管理團(tuán)隊(duì)組建而成,專門從事以抗體、蛋白、細(xì)胞、化學(xué)品為核心的試劑產(chǎn)品研發(fā)與銷售。
我們長(zhǎng)期聚焦于生命科學(xué)、生物醫(yī)藥、醫(yī)療診斷、分析檢測(cè)等領(lǐng)域,專注于為生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。提供生命科學(xué) 試劑、供應(yīng)鏈服務(wù)等,為更多的生命科學(xué)科研工作者提供 專業(yè)、全面、安全、快捷的產(chǎn)品和服務(wù)。產(chǎn)品覆蓋 基因、蛋白、細(xì)胞、組織、動(dòng)物等水平的各種研究。
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