參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：刺激隱核蟲PCR檢測試劑盒
型號　:　　 EY00P351
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
實驗操作過程：
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標準曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進行梯度稀釋， 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下：
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，
輕微振蕩混勻，簡短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。
3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時快速離心 5s，渦旋振蕩和快速離心各重復 3 次。
5,按表 2 依次進行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀釋

二、加樣回收質控 ERC 的制備
根據(jù)待測樣本的殘留量設置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例)，操作如下：
1，取待測樣本 100u，加至 1.5ml 干凈的離心管中；
2，加入 1.5ul SD2，混勻，標記為樣本 ERC。
注：樣本 ERC 和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
三、陰性質控 NEG 的制備

根據(jù)實驗設置陰性質控，操作如下：
1，取 100ul 樣本基質溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標記為陰性質控 NEG。 注：陰性質控 NEG 樣本和同批待測樣本需一起進行樣本前處理。
四、 qPCR 反應液的制備和加樣
1，根據(jù)所要檢測的標準曲線及待測樣本數(shù)量，計算所需反應孔數(shù)，一般做 3 個重復孔/樣。
反應孔數(shù)=  (6 個濃度梯度+1 個無模板對照 NTC+1 個陰性質控 NEG+待測樣本×2) ×3 注：待測樣本×2 是為了讓每個待測樣本檢測時都同時做樣本 ERC 。                  2，根據(jù)反應孔數(shù)計算本次實驗所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix：
2×Taqman master mix=(反應孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix=  (反應孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O=  (反應孔數(shù)+2) ×2ul
3，各試劑置于冰上融化，振蕩混勻，按表 3 所示進行加樣：
                                  表 3.各反應孔加樣示例

注意事項
1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3.每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5.試劑盒內所配陰性和陽性對照在次使用前應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7.儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
 小鼠T細胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝動脈內皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL大內皮素-1（1-38），Big Endothelin-1 (1-38), human質量規(guī)格：>95%,BR

MLF, 小鼠成纖維細胞 Mouse大內皮素-1 （1-39），豬Big Endothelin -1 (1-39),porcine質量規(guī)格：>95%,BR

FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 細胞裂解液 (陽性對照) 腦鈉素-32，大鼠BNP-32, rat質量規(guī)格：>95%,BR

結直腸腺癌細胞;LS 174T [LS174T]鈴蟾肽Bombesin質量規(guī)格：>95%,BR

TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 緩激肽Bradykinin質量規(guī)格：>95%,BR

刺激隱核蟲PCR檢測試劑盒槲皮苷(標準品）Quercitrin質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品  MousereceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISA試劑盒小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒 ，英文名： ICAM-1/CD54 ELISA Kit

β-谷甾醇β-Sitosterol質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品  小鼠1酸化表皮生長因子受體(pEGFR)ELISA試劑盒 ，英文名： pEGFR ELISA Kit  Mousemalondialchehyche,MDAELISA試劑盒小鼠二(MDA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

光甘草定Glabridin質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品  大鼠固酮(ALD)ELISA檢測試劑盒rataldosterone,ALDELISAKit 96T/48T  ELISAKitAChRab兔乙酰膽堿受體抗體規(guī)格：48T/96T

鬼臼（標準品）Podophyllotoxin質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品  人抵抗素樣分子β(RELM-β)試劑盒 Human RELM-β ELISA Kit  Elisa荷蘭賽迪口蹄疫0型2板ELISA試劑盒2*96孔2*96孔

殺蟲脲(標準品)質量規(guī)格：分析標準品Triflumuron  ELISAKitPAP人纖溶酶抗纖溶酶復合物規(guī)格：48T/96T  內臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA試劑盒 ，英文名： vaspin ELISA Kit

戊菌隆(分析標準品,99.5%)質量規(guī)格：分析標準品,99.5%Pencycuron  小鼠肝配蛋白B受體3(EPHB3)ELISA試劑盒 ，英文名： EPHB3 ELISA Kit  rabbitTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISA試劑盒兔子組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

噻螨酮標準溶液(100μg/ml,u=3%)質量規(guī)格：100μg/ml,u=3%Hexythiazox solution  人高速泳動蛋白17(HMG-17)ELISA檢測試劑盒Humanhighmobilitygroupprotein17,HMG-17ELISAKit 96T/48T  HumanBonemorphogeneticprotein7,BMP-7ELISA試劑盒人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

噻螨酮標準溶液(10μg/ml,u=6%)質量規(guī)格：10μg/ml,u=6%Hexythiazox solution  大鼠神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒 Rat glial fibrillary ic protein,GFAP ELISA Kit  HumanCyclin-dependekinase1,CDK-1ELISAKit人周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T