參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：無(wú)乳鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒
型號(hào)　:　　 EY00P1104
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運(yùn)輸：低溫
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程：
一、 CHO DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 CHO control DNA 進(jìn)行梯度稀釋， 稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具體操作如下：
1.將試劑盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，
輕微振蕩混勻，簡(jiǎn)短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標(biāo)記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5, SD6。
3，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul  CHO  control  DNA 加入 SD1 管中，  然后渦旋振蕩混勻 5- 10s 后短時(shí)快速離心 5s，渦旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進(jìn)行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
                                 表 2. CHO control DNA 的稀釋

二、加樣回收質(zhì)控 ERC 的制備
根據(jù)待測(cè)樣本的殘留量設(shè)置 ERC 中 CHO  control  DNA 的加樣濃度  (以制備加 45pg  CHO control DNA 的樣本 ERC 為例)，操作如下：
1，取待測(cè)樣本 100u，加至 1.5ml 干凈的離心管中；
2，加入 1.5ul SD2，混勻，標(biāo)記為樣本 ERC。
注：樣本 ERC 和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
三、陰性質(zhì)控 NEG 的制備

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)置陰性質(zhì)控，操作如下：
1，取 100ul 樣本基質(zhì)溶液(或洗脫液)加至 1.5ml 干凈的離心管中標(biāo)記為陰性質(zhì)控 NEG。 注：陰性質(zhì)控 NEG 樣本和同批待測(cè)樣本需一起進(jìn)行樣本前處理。
四、 qPCR 反應(yīng)液的制備和加樣
1，根據(jù)所要檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線及待測(cè)樣本數(shù)量，計(jì)算所需反應(yīng)孔數(shù)，一般做 3 個(gè)重復(fù)孔/樣。
反應(yīng)孔數(shù)=  (6 個(gè)濃度梯度+1 個(gè)無(wú)模板對(duì)照 NTC+1 個(gè)陰性質(zhì)控 NEG+待測(cè)樣本×2) ×3 注：待測(cè)樣本×2 是為了讓每個(gè)待測(cè)樣本檢測(cè)時(shí)都同時(shí)做樣本 ERC 。                  2，根據(jù)反應(yīng)孔數(shù)計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)所需的各組分的所需總量以制備 pre-mix：
2×Taqman master mix=(反應(yīng)孔數(shù)+2) ×15ul    (含有 2 孔的損失量)
10×CHO qPCR mix=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×3ul
RNase-free H2O=  (反應(yīng)孔數(shù)+2) ×2ul
3，各試劑置于冰上融化，振蕩混勻，按表 3 所示進(jìn)行加樣：
                                  表 3.各反應(yīng)孔加樣示例

注意事項(xiàng)
1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
 LY96 Others Mouse 小鼠 LY-96 / ESOP-1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 二十三烷(>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Tricosane

膀胱微血管內(nèi)皮細(xì)胞HBIMEC二十四烷(>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Tetracosane

hFOB 1.19細(xì)胞，SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞 癌細(xì)胞(耐阿霉素),MCF-7/ADR細(xì)胞 小鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞MA-c二甲戊樂(lè)靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%Pendimethaline

牛陀螺狀細(xì)胞;BT氯菊酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品Permethrin (isomers) solution

LY86 Others Mouse 小鼠 LY86 / MD1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 殘殺威標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% Propoxur solution

無(wú)乳鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒膽油醇碳酸酯(>70.0%(HPLC))Cholesterol Oleyl Carbonate質(zhì)量規(guī)格：>70.0%(HPLC)  化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)光澤精化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50  病毒通用型(AIV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T

三十二烷(standard for GC,≥98.0%(GC))Dotriacontane質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥98.0%(GC)  RatIerleukin10,IL-10ELISA試劑盒大鼠白介素10(IL-10)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  HumanpapillomavirusIgM,HPV-IgMELISA試劑盒人狀瘤病毒抗體IgM(HPV-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

正庚醇(Standard for GC,>99.5%(GC))1-Heptanol質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99.5%(GC)  小鼠抑制素βE(INHβE)ELISA試劑盒 ，英文名： INHβE ELISA Kit  ELISAKitET-1豬內(nèi)皮素1規(guī)格：48T/96T

γ -丁內(nèi)酯（GBL）(standard for GC,≥99.9%(GC))4-Hydroxybutanoic  lactone質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.9%(GC)  兔子抗中性粒細(xì)胞顆?？贵w(ANGA)ELISA檢測(cè)試劑盒Rabbitai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit 96T/48T  HumanelonginA,EloAELISAKit人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

馬尿酸Hippuric 質(zhì)量規(guī)格：>98%  小鼠硒蛋白M(SELM)ELISA試劑盒 ，英文名： SELM ELISA Kit  ELISAKitPGF小鼠前列腺素F規(guī)格：48T/96T

扁蓄苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Avicularin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  小鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousekeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit 96T/48T  Humanai-thymocyteglobulin,ATGELISAKit人抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

匹莫苯丹Pimobendan質(zhì)量規(guī)格：>98%  人核糖核酸酶(RNASE1/RIB1/RNS1)試劑盒 Human ribonuclease pancreatic,RNASE1/RIB1/RNS1 ELISA kit  人1脂酶A2(PLA-2)Elisa 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

莫吉司坦Moguisteine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR  RatDihydrotestosterone,DHTELISAKit大鼠雙氫睪同(DHT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  小鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)試劑盒 Mouse pregnancy associated plasma protein A,PAPP-A ELISA Kit