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服務(wù)流程：

接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)謩e配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。

實(shí)驗(yàn)外包:

1.基因組學(xué)：基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析

2.轉(zhuǎn)錄組學(xué)：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq

3.蛋白質(zhì)組學(xué)：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

4.基因檢測(cè)：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白質(zhì)檢測(cè)：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA

6.病理檢測(cè)：HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選

7.代謝組學(xué)：GC-MS、LC-MS、NMR

8.細(xì)胞及動(dòng)物模型：原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：

①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

抗GST標(biāo)簽鼠單克隆抗體（可提供標(biāo)記服務(wù)）

抗Beta Actin鼠單克隆抗體（可提供標(biāo)記服務(wù)）

抗Beta Actin兔多克隆抗體（可提供標(biāo)記服務(wù)）

抗GAPDH鼠單克隆抗體（可提供標(biāo)記服務(wù)）

抗GAPDH兔多克隆抗體（可提供標(biāo)記服務(wù)）

Western Blot與IP細(xì)胞裂解液（可提供標(biāo)記服務(wù)）

BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒（可提供標(biāo)記服務(wù)）

彩色預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(10-180 kDa)（可提供標(biāo)記服務(wù)）

SDS-PAGE凝膠配制試劑盒（可提供標(biāo)記服務(wù)）

PBS (Phosphate Buffered Saline, pH7.5, 10x)（可提供標(biāo)記服務(wù)）

AuraECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒（可提供標(biāo)記服務(wù)）

RIPA裂解液（強(qiáng)）（可提供標(biāo)記服務(wù)）

Bradford蛋白定量檢測(cè)試劑盒（可提供標(biāo)記服務(wù)）

彩色預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(10-250 kDa)（可提供標(biāo)記服務(wù)）

SDS-PAGE電泳液（粉劑）（可提供標(biāo)記服務(wù)）

PBST (Phosphate Buffered Saline Tween-20, pH7.5, 10x)（可提供標(biāo)記服務(wù)）

AuraECL Plus化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒（可提供標(biāo)記服務(wù)）

RIPA裂解液（中）（可提供標(biāo)記服務(wù)）

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液（BSA）（可提供標(biāo)記服務(wù)）

彩色預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(40-300 kDa)（可提供標(biāo)記服務(wù)）

 小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑盒

 小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒

 小鼠大內(nèi)皮素(BigET)ELISA試劑盒

 小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒

 小鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒

 小鼠白介素27(IL-27)ELISA試劑盒

 小鼠兒茶酚胺(CA)ELISA試劑盒

 小鼠抗促甲狀腺素受體抗體(TRAb)ELISA試劑盒

 小鼠甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒

 小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒

 小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒

 小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA試劑盒

 小鼠葡萄糖依賴(lài)性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒

 小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒

 小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒

 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒

 小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA試劑盒

 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)elisa檢測(cè)試劑盒

 人α抗胰糜蛋白酶(AACT)elisa檢測(cè)試劑盒

 小鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒

 人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒

 人表面活性蛋白A(SP-A)elisa檢測(cè)試劑盒

 小鼠內(nèi)皮素(ET-)ELISA試劑盒

溶藻弧菌核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/strong>人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)elisa檢測(cè)試劑盒

 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)elisa檢測(cè)試劑盒

 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)elisa檢測(cè)試劑盒

使用方法：

一、樣品DNA的制備用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。

二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。

1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。

2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL純水（*用帶芯槍頭，下同）。

3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。

4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。

5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。

7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。

8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。