1.售前須知:
B16系列細(xì)胞,使用DMEM培養(yǎng)時(shí)可能出現(xiàn)黑色素快速積累,細(xì)胞不增殖或死亡的情況,該細(xì)胞正常擴(kuò)增凍存請(qǐng)使用RPMI-1640完培,若您需要進(jìn)行分泌黑色素等后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn),可以在擴(kuò)增凍存細(xì)胞后更換為DMEM培養(yǎng)來(lái)滿足實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
2.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng) B16-F10
細(xì)胞別稱(chēng) B16/F10; B16 F10; B16F10; B16 melanoma F10
細(xì)胞背景描述 B16-F10細(xì)胞是B16-F0細(xì)胞的亞系。
供體年齡 不詳
組織來(lái)源 器官:皮膚;品系:C57BL/6J;疾病:黑色素瘤
細(xì)胞形態(tài) 梭形細(xì)胞樣;上皮樣細(xì)胞樣
細(xì)胞類(lèi)型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類(lèi)型 黑色素瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 1
3.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 RPMI-1640(PM150110)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
4.傳代方法:
傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時(shí)間 1~2分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
本產(chǎn)品僅供科研使用。不能用于人和動(dòng)物治療等其它臨床診斷使用!以實(shí)際收貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),網(wǎng)站說(shuō)明書(shū)僅供參考。