1.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡稱 T-47D
細(xì)胞別稱 T-47-D; T47-D; T47D:A; T47D
細(xì)胞背景描述 T-47細(xì)胞分離自一位54歲乳房侵入性導(dǎo)管癌的女性患者胸水;發(fā)現(xiàn)分化的上皮亞株(T-47D)有細(xì)胞質(zhì)連接和17-β-雌二醇及其他類固醇降血鈣素的受體,T-47D細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因。
供體年齡 女
組織來源 乳腺;乳房;導(dǎo)管;來自導(dǎo)管癌肋膜滲出液轉(zhuǎn)移灶
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 乳腺癌細(xì)胞
生長特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 RPMI-1640(PM150110)+0.2U/ml Insulin+10% FBS(164210-50)+1%
P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時間 2~3分鐘
傳代比例(密度) 1:2-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時間 ~36-46 hours
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