1.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng) KB
細(xì)胞別稱(chēng) Strain KB
細(xì)胞背景描述 最初認(rèn)為,KB細(xì)胞源自口腔表皮癌,但隨后通過(guò)同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn),KB細(xì)胞的起源是HeLa細(xì)胞污染的。KB細(xì)胞角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性,有報(bào)告稱(chēng)KB細(xì)胞含有人乳頭狀瘤病毒18(HPV-18)序列。(STR檢測(cè)位點(diǎn)同HELA)
供體年齡 30歲
組織來(lái)源 起源HeLa細(xì)胞污染
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類(lèi)型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類(lèi)型 其它腫瘤細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 2
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 MEM(含NEAA)(PM150410)+10% FBS(164210-50)+1%
P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~30 hours
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