Kasumi-1人急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞產(chǎn)品基本信息

　　細(xì)胞名稱：Kasumi-1人急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞

　　來(lái)源：ATCC

　　規(guī)格：1x106cells/T25或1mL凍存管

　　細(xì)胞貨期現(xiàn)貨，1周左右

　　種屬來(lái)源：人

　　組織來(lái)源：外周血

　　細(xì)胞形態(tài)：原粒細(xì)胞

　　生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

　　培養(yǎng)基: RPMI-1640+20% FBS+1%GlutaMAX-1谷+氨酰胺

　　1%Sodium Pyruvate丙酮酸鈉+PS

　　生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

　　傳代方法：1:2至1:4，每周 3次

　　凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

　　支原體檢測(cè)：無(wú)

　　注意事項(xiàng)：限于科學(xué)研究等非醫(yī)療目的，不可用于人類或者動(dòng)物的臨床診斷使用

　　注意：收貨時(shí)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)物中有部分死細(xì)胞和細(xì)胞碎片，此為正?，F(xiàn)象。該細(xì)胞會(huì)有輕微聚團(tuán)，輕輕吹開(kāi)即可。細(xì)胞密度應(yīng)保持在合適范圍，不能過(guò)稀。

　　細(xì)胞培養(yǎng)操作

　　1)復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　2)細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;

　　a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，然后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

　　b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量對(duì)應(yīng)加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

　　c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

　　培養(yǎng)注意事項(xiàng)

　　1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

　　2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

　　3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞，死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

　　4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

　　5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

　　6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

　　7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

　　8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后一次傳代建議1：2傳代 。

　　9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

　　懸浮細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)：

　　1、收貨時(shí)需鏡下拍照(看密度、狀態(tài))

　　2、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)

　　a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng)

　　b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度

　　c.如密度90%，建議傳代

　　3、換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)(使細(xì)胞沉到瓶底);收集上清，必須將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤(rùn)洗瓶底并收集!離心轉(zhuǎn)速為1000rpm，5min。