二噁英檢測試劑盒

PN 530037

注意：在使用前請認(rèn)真閱讀說明書（請以英文為準(zhǔn)，中文僅供參考）

1、概述

二噁英檢測試劑盒利用競爭性酶聯(lián)免疫原理。適用于定量或定性檢測水樣、土壤、泥沙或魚蝦產(chǎn)品中二噁英的含量。其他樣品的提取步驟請與我公司聯(lián)系。如果有必要陽性樣品可以通過HPLC, GC/MS或其他的傳統(tǒng)方法證實(shí)測定結(jié)果。

2、安全說明

底物中含有四甲基聯(lián)苯胺。終止液也含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸。如果不小心接觸了請用大量的水沖洗。

3、儲存和穩(wěn)定性

二噁英檢測試劑盒應(yīng)該保存在4–8°C。在使用之前試劑盒中的試劑要恢復(fù)到室溫。試劑盒在有效期內(nèi)可以使用。

4、原理

Abraxis二噁英檢測試劑盒的原理是間接接競爭酶聯(lián)免疫反應(yīng)。通過特異性抗體來識別二噁英。樣品中二噁英和包被在板底部的二噁英類似物同時競爭性跟二噁英抗體結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。洗板，加入酶標(biāo)記二抗，與結(jié)合在底部的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合。洗板，加入底物顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)；樣品中的二噁英濃度與顯現(xiàn)出的藍(lán)色的深度成反比。加入反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在450nm波長進(jìn)行檢測，通過做標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每個樣品中二噁英的含量。

5、二噁英檢測試劑盒的限制和可能的干擾

樣品中的很多易出現(xiàn)的有機(jī)物和無機(jī)物已經(jīng)被檢測表明對試劑盒的檢測沒有干擾。然而由于樣品中化合物的多變性引起的基質(zhì)效應(yīng)是不可能完全避免的。在使用的過程中出現(xiàn)失誤也會影響結(jié)果，比如：試劑盒保存條件不對、錯誤的加液順序、試劑的量沒有加準(zhǔn)確、孵育的時間太長或太短、孵育的溫度太高或太低（低于10°C或高于30°C）。和其它檢測方法一樣對陽性結(jié)果要求通過其它傳統(tǒng)的方法來驗(yàn)證。

6、二噁英檢測的重要性

多氯二苯并-對-二惡英 polychlorinated dibenzo-p-dioxin簡稱PCDDs）和多氯二苯并呋喃 polychlorinated dibenzofuran（簡稱PCDFs）作為環(huán)境污染物威脅人類的健康。這種污染物是高毒性的，能導(dǎo)致人類肝臟損害，影響生殖系統(tǒng)和發(fā)育。

二噁英有75種異構(gòu)體多氯代二苯 (PCDD)和 135種異構(gòu)體多氯二苯并呋喃 (PCDF)，其中2,3,7,8-四氯代二苯-并-對二惡英（2,3,7,8-TCDD）是迄今為止人類已知的毒性最強(qiáng)的污染物，國際上常把各同類物折算成相當(dāng)于2,3,7,8-TCDD的量來表示，稱為毒性當(dāng)量（Toxic Equivalent Quangtity，簡稱TEQ）。為此引入毒性當(dāng)量因子（Toxic Equivalency Factor，簡稱TEF）的概念，即將某PCDDs/PCDFs的毒性與2,3,7,8-TCDD的毒性相比得到的系數(shù)。

二噁英的檢測作為衡量環(huán)境污染的指標(biāo)是很重要的。檢測這些大分子混合物是很復(fù)雜且昂貴的事情，需要花費(fèi)大量的時間，昂貴的儀器和復(fù)雜的凈化裝置，氣象色譜是首選檢測方法，但是檢測樣品較少，成本很高。ABR二噁英ELISA檢測方法提供了簡單高效低成本的檢測方法。

工作指導(dǎo)

A 試劑盒組成

1、96孔酶標(biāo)板：包被有二噁英類似物，1塊（12條×8孔）。
2、二噁英標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶，濃度分別為0, 2.5, 5, 10, 25和50ppt

3、二噁英抗體

4、二噁英酶標(biāo)記二抗

5、5×濃縮洗液

6、底物顯色液（TMB）

7、終止液 

8、稀釋液：50%二甲基亞砜水溶液，0.01% Triton X-100(用于調(diào)節(jié)樣品稀釋倍數(shù))

B、檢測準(zhǔn)備

微量移液器和吸頭是必須使用的，推薦使用排槍來添加結(jié)合物、抗體、底物和終止液，這樣可以保證整個酶標(biāo)板的孵育時間一致。在做同一次測試時要使用同一個盒子里的試劑和標(biāo)準(zhǔn)。

1、使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-25℃）。

2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。置于4-8℃保存。

3、標(biāo)準(zhǔn)液，抗體，底物，終止液不用稀釋直接使用。

4、以1：5的比例稀釋洗液（如果要使用一整瓶那么100ml洗液+ 400ml蒸餾水或無離子水）。

5、由于終止液中包含酸，拿的時候要小心。

C、檢測步驟

使用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來使其達(dá)到室溫。從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。

1、在對應(yīng)的玻璃管中加入125μL標(biāo)準(zhǔn)和樣品。在每個玻璃管都加入125 μL二噁英抗體溶液。混勻，室溫放置60min。

2、在對應(yīng)測試孔加入100 μL混合物（步驟1），用膠帶蓋上，通過移動酶標(biāo)板來混合液體。在室溫下孵育60分鐘。

3、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，拍板，去掉殘留的洗液，重復(fù)三次，總共四次洗板。

4、每個測試孔加入100μL二噁英酶標(biāo)記二抗，用膠帶蓋上，通過移動酶標(biāo)板來混合液體。在室溫下孵育30分鐘。

5、孵育完成后，將微孔中的溶液倒入水槽中，用1X 洗液加滿微孔然后倒掉，拍板，去掉殘留的洗液，重復(fù)三次，總共四次洗板。

6、每個測試孔加入100μL底物顯色液。通過移動酶標(biāo)板來混合液體，混合30秒。在室溫下孵育20min，避免陽光直射。

7、每個測試孔加入100μL終止液。

8、在加入終止液15分鐘內(nèi)，450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD）。

D. 結(jié)果分析

可以利用商業(yè)ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 來評價ELISA結(jié)果。也可以通過計(jì)算每個標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0值，以%B/B0為y軸、二噁英濃度為x軸作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品濃度可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算。當(dāng)樣品中二噁英的濃度小于2.5ppt 時即為陰性樣品。當(dāng)樣品中二噁英的濃度大于50ppt 時要稀釋后再測定。