COLO 201人結直腸腺癌細胞(STR鑒定正確)產品基本信息

　　細胞名稱：COLO 201，人結直腸腺癌細胞

　　來源：ATCC

　　規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管

　　細胞貨期現貨，1周左右

　　種屬來源：人

　　組織來源：結直腸

　　細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

　　生長特性：半貼壁半懸浮生長

　　培養(yǎng)基:：90% RPMI-1640+10% FBS+PS

　　生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

　　傳代方法：1:2至1:3，每周 3次

　　凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

　　支原體檢測：無

　　注意事項：限于科學研究等非醫(yī)療目的，不可用于人類或者動物的臨床診斷使用

　　注：該細胞為半貼壁細胞，懸浮部分細胞按懸浮細胞操作處理，貼壁部分按貼壁細胞處理。

　　COLO 201人結直腸腺癌細胞(STR鑒定正確)細胞培養(yǎng)操作

　　1)復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　a、收集細胞上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次;

　　b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　c、按3-4 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;

　　a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數。

　　b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

　　c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

　　培養(yǎng)注意事項

　　1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

　　2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

　　3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞，死亡破碎形成碎片，是正常現象。.觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。

　　4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 -5min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

　　5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

　　6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

　　7. 該細胞僅供科研使用。

　　8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后一次傳代建議1：2傳代 。