A172人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(STR鑒定正確)產(chǎn)品基本信息
細(xì)胞名稱:A172,人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
來源:ATCC
規(guī)格:1×106cells/T25或1mL凍存管
細(xì)胞貨期:現(xiàn)貨,1周左右
種屬來源:人
組織來源:腦
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)基::90%DMEM+10%FBS+PS
生長(zhǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代方法:1:2,每周2次
凍存條件:無血清細(xì)胞凍存液,液氮儲(chǔ)存
支原體檢測(cè):無
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3
min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4
mL完全培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3min(視細(xì)胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000
rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1.
收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否完全揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2.
仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3.
用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞,死亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。.觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞,再900
rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6.
建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。
8. 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。
收到細(xì)胞后一次傳代建議1:2傳代 。
9. 注意: 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。
關(guān)鍵字: A172人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(STR鑒定正;A172;A172細(xì)胞;
廈門逸漠生物科技有限公司(Xiamen Immocell Biotechnology Co.,Ltd.)坐落于廈門國(guó)家留學(xué)創(chuàng)業(yè)園(翔安)產(chǎn)業(yè)園,是一家專注于細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域新產(chǎn)品、新技術(shù)開發(fā)的高新技術(shù)企業(yè)。公司產(chǎn)品涵蓋:細(xì)胞系、原代細(xì)胞、標(biāo)記細(xì)胞、耐藥細(xì)胞、免疫細(xì)胞及胎牛血清、培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無血清冷凍液、支原體/黑膠蟲清除劑、細(xì)胞因子等產(chǎn)品,提供細(xì)胞形態(tài)和免疫相關(guān)檢測(cè)、流式細(xì)胞檢測(cè) 、細(xì)胞學(xué)服務(wù)、分子生物學(xué)檢測(cè)等多種技術(shù)服務(wù)。
逸漠生物(IMMOCELL)擁有一支具有深厚造詣和豐富經(jīng)驗(yàn)的高端技術(shù)人才,建設(shè)了高規(guī)格的研發(fā)實(shí)驗(yàn)室與生產(chǎn)車間,建立了規(guī)范的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、客服管理體系。公司與國(guó)內(nèi)外多家醫(yī)院、高等院校、科研院所、生物醫(yī)藥公司建立了良好的合作關(guān)系,贏得了良好的市場(chǎng)聲譽(yù)和廣泛的客戶認(rèn)可,努力成為生命科學(xué)界可靠的合作伙伴和堅(jiān)強(qiáng)的技術(shù)后盾。