1.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱 CT26.WT
細(xì)胞別稱 CT26WT
細(xì)胞背景描述 CT26細(xì)胞是以N-亞硝基-N-甲基氨基甲酸酯(NNMU)誘導(dǎo)形成的未分化結(jié)腸癌細(xì)胞株,它克隆形成的細(xì)胞株命名為CT26.WT。用包含編碼典型腫瘤相關(guān)抗原(TAA)β-半乳糖苷酶(β-gal)的lacZ基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體LXSN穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CT26.WT細(xì)胞,得到致死的亞克隆CT26.CL25。即使CT26.CL25細(xì)胞表達(dá)了典型的TAA-β-半乳糖苷酶,在正常小鼠中CT26.CL25細(xì)胞和CT26.WT細(xì)胞的生長(zhǎng)率與致死率也保持基本一致。CT26.WT細(xì)胞與CT26.CL25細(xì)胞一起可用作測(cè)試免疫治療程序的模型,并用于研究宿主免疫反應(yīng)。
供體年齡 不詳
組織來源 器官:結(jié)腸;品系:BALB/c;疾病:癌
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 腸癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 RPMI-1640(PM150110)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時(shí)間 1~2分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周