1.售前須知:
該細(xì)胞較難消化,注意延長消化時間,消化到細(xì)胞收縮變圓,輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)邊,細(xì)胞可以滑落方可終止消化。
2.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡稱 Calu-3
細(xì)胞別稱 CaLu-3; CALU-3; Calu 3; Calu3; CALU3
細(xì)胞背景描述 Calu-3細(xì)胞是從一名25歲的白人男性肺腺癌患者的胸水中分離建系的;該患者曾使用過環(huán)磷酰胺、博來霉素、阿霉素進(jìn)行治療。Calu-3細(xì)胞接種至裸鼠可成瘤;Calu-3細(xì)胞亦可作轉(zhuǎn)染宿主。
供體年齡 男;25歲
組織來源 肺;轉(zhuǎn)移灶;胸水腺癌
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 肺癌細(xì)胞
生長特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級 1
3.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 MEM(含NEAA)(PM150410)+10% FBS(164210-50)+1%P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
4.傳代方法:
傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時間 5~8分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時間 ~35-45 hours