1.售前須知:
1. 細胞貼壁慢特別是剛復蘇時,一般兩到三天貼壁展開,會有空泡; 2. 細胞在傳代細胞中注意消散,不然難貼壁; 3. 成團生長,細胞密度越大,表面空泡黑點越多;4. 一般細胞長至80%傳代,細胞成片,其實密度很大; 5. 細胞生長太滿對細胞狀態(tài)影響嚴重,傳代后易碎,死亡; 6. 細胞生長時間越久,消化難度也會隨之增加;消化到輕拍培養(yǎng)瓶側邊細胞可以滑落的時候可以終止。
2.細胞起源:
細胞簡稱 Caco-2
細胞別稱 CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2;Caco-2/ATCC細胞背景描述 Caco-2細胞分離自直腸原位癌;當長到滿時,Caco-2細胞表現(xiàn)出特征性的腸上皮細胞分化。Caco-2細胞表達維甲酸結合蛋白I和維甲酸
結合蛋白Ⅱ,并呈角質蛋白陽性。
供體年齡 男;72歲
組織來源 結腸,結直腸腺癌
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 腸癌細胞
生長特性 貼壁細胞
生物安全等級 1
3.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 MEM(含NEAA)(PM150410)+20% FBS(164210-50)+1%P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
液氮
4.傳代方法:
傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯變圓有間隙時可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細胞使之脫壁并在液體里反復吹打使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液;
6、收集細胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
消化時間 3~5分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時間 ~60-80 hours