1.細胞起源:
細胞簡稱 BEL-7402
細胞別稱 Bel-7402; BEL 7402; Bel 7402; BEL7402; Bel7402
細胞背景描述 BEL-7402細胞是于1974年從臨床肝癌手術(shù)標本中建立的;BEL-7402細胞群體倍增時間為20小時,移植到處理過的Wistar大鼠中的能形成腫瘤結(jié)節(jié),BEL-7402細胞形態(tài)呈上皮樣細胞。在電子顯微鏡下,BEL-7402細胞亦顯示上皮細胞所具有的橋粒和張力原纖維,與臨床肝癌細胞相似。BEL-7402細胞分瓶培養(yǎng)第四天時,其有絲分裂指數(shù)約為7%。BEL-7402細胞的染色體數(shù)為不足三倍體,有一個異常的近端著絲點染色體。間接免疫熒光法測BEL-7402細胞內(nèi)的AFP為陽性反應(yīng);LDH同工酶譜顯示,BEL-7402細胞與成年人肝細胞不同,而與人胚肝及臨床肝癌相近。(STR檢測位點同HELA)
供體年齡 男
組織來源 肝癌
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 肝膽癌細胞
生長特性 貼壁細胞
生物安全等級 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 RPMI-1640(PM150110)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5% 37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯變圓有間隙時可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液;
6、收集細胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yǎng)。
傳代比例(密度) 1:2-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時間 ~32-48 hours