貨號(hào):HH0202-01;HH0202-02;HH0202-03;HH0202-04
技術(shù)指標(biāo)
外觀:白色無(wú)定型凍干粉末;蛋白純度:≥90%;比活性:≥4U/mg酶粉;過(guò)氧化氫酶:≤0.03%;肌酐酶:≤0.01%;肌氨酸氧化酶:≤0.01%NADH氧化酶:≤0.01%。
酶學(xué)性質(zhì)
來(lái)源:微生物;分類:EC3.5.3.3;分子量:48kDa(SDS-PAGE);等電點(diǎn):4.6;Km值:1.7×10-2M(Creatine);抑制劑:Ag+,Cu2+,Hg2+;最適:pH7.5;最適溫度:45-50℃;pH穩(wěn)定性:4.5-10.0(25℃,16h);熱穩(wěn)定性:50℃以下穩(wěn)定(pH7.5,30min);穩(wěn)定性:-20℃靜置保存12個(gè)月保持90%以上活性;保護(hù)劑:EDTA及糖類物質(zhì)。
用途:水解肌酸,用于酶法肌酐試劑的研發(fā)和大量配制。
尿素(Urea)和DAB(ρ-dimethylaminobenzaldenhyde)反應(yīng)形成的黃色染料的量可通過(guò)分光光度計(jì)在435nm檢測(cè)。
酶活定義:?jiǎn)挝幻富疃x為在下述條件下,每分鐘催化反應(yīng)生成1μmol肌酸完全轉(zhuǎn)化為肌氨酸所需的酶量。
試劑準(zhǔn)備
試劑I:0.1M肌酸溶液。
試劑II:將2.0gDAB溶解在100mL二甲亞砜中,并加入15mL濃鹽酸。
酶稀釋液:50mMPBS,pH7.5,樣品用酶稀釋液將酶稀釋至2.0-3.0U/mL。
操作步驟
1.取1mL試劑I于5mLEP管中,37℃預(yù)熱5min。
2.加入0.1mL酶液,混勻。
3.37℃水浴反應(yīng)10min后,加入2.0mL試劑II終止反應(yīng),并在25℃放置20min。
4.使用紫外分光光度計(jì),測(cè)定反應(yīng)液在435nm處吸光度值。
5.酶稀釋液代替酶液作為空白對(duì)照。
關(guān)鍵字: 肌酸脒基水解酶;肌酸酶;肌酸脒基水解酶試劑;
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