丙酮酸脫羧酶（pyruvate decarboxylase,PDC）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/48樣
注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
丙酮酸脫羧酶（pyruvate decarboxylase,PDC）活性測(cè)定試劑盒測(cè)定意義：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
測(cè)定原理：
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來(lái)進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；通過(guò)測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來(lái)計(jì)算PDC活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體36mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1支，﹣20℃保存。
試劑五：液體60μL×1支，﹣20℃保存。
混合試劑：臨用前配制，將試劑四和試劑五轉(zhuǎn)移至試劑三中充分溶解待用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑六：液體5mL×1瓶，4℃保存。
丙酮酸脫羧酶（pyruvate decarboxylase,PDC）活性測(cè)定試劑盒粗酶液提?。?/span>
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）等液體樣品：直接檢測(cè)。
PDC測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、100μL混合試劑、700μL試劑二和100μL試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A1和A2。
4. 測(cè)定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、100μL混合試劑、700μL試劑二和100μL試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A3和A4。
注意：空白管只需測(cè)定一次。
PDC活性計(jì)算公式：
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(Cpr×V樣) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min /g鮮重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按血清（漿）體積計(jì)算
活性單位定義：25℃中，每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個(gè)酶活單位。PDC (nmol/min /mL) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷V樣÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V總：反應(yīng)體系總體積，1mL=0.001 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.1mL；Cpr：蛋白濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g ；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min。
關(guān)鍵字： 丙酮酸脫羧酶（pyruvate deca;丙酮酸脫羧酶（pyruvate deca;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛(ài)，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。