游離膽固醇（free cholesterol, FC）含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
游離膽固醇（free cholesterol, FC）含量測(cè)定試劑盒測(cè)定意義：
FC是構(gòu)成細(xì)胞膜的主要成分，也是合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及維生素D等生理活性物質(zhì)的重要原料。FC濃度可作為脂代謝的指標(biāo)。
測(cè)定原理：
FC氧化酶催化FC生成△4-膽甾烯酮和H2O2，過(guò)氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成紅色醌類化合物，在500nm有吸收峰，其顏色深淺與FC含量成正比。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、異丙醇和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：異丙醇50mL（自備）；
試劑二：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體100μL×1瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，濃度為0.5 μ mol/mL，4℃保存。
FC的提取：
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：先收集400-500萬(wàn)細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），即FC待測(cè)液。
3．血清（漿）樣品：直接測(cè)定。
游離膽固醇（free cholesterol, FC）含量測(cè)定試劑盒測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到500 nm，蒸餾水調(diào)零。
2.FC工作液的配制：臨用前，吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，FC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC標(biāo)準(zhǔn)液和900μL FC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC待測(cè)液和900μL FC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
5、空白管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL 試劑一和900μL FC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
注意：
1、 標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)定一次。
2、若測(cè)定管產(chǎn)生白色渾濁，可以將待測(cè)液用異丙醇稀釋2~5倍后測(cè)定，并在最后結(jié)果乘以相應(yīng)倍數(shù)。
計(jì)算公式：
1. 血清（漿）中FC含量計(jì)算：
FC含量（μmol /dL）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×100mL
=50×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 組織中FC含量計(jì)算：
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
FC含量（μmol / mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
= 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
FC含量（μmol / g鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
= 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g/mL
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中FC含量計(jì)算：
FC含量（μmol /104 cell）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L）
=0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L）
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL。
最低檢出限為1nmol/mL。
關(guān)鍵字： 游離膽固醇（free cholester;游離膽固醇（free cholester;
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