β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)試劑盒測定意義:
β-GD廣泛存在于動物組織中,是一種參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程的基質(zhì)降解酶,具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細(xì)胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富,測定胃液β-GD活性對于研究胃癌具有重要的意義。
測定原理:
β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產(chǎn)生游離的酚酞,通過測定苯酚含量反應(yīng)該酶活性高低。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體5mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入5mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體37.5mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液10mL,4℃保存;
樣品測定的前處理:
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)試劑盒測定步驟:
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定(在EP管中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 加樣孔 |
測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
試劑一 | 100 | 100 | 100 |
試劑二 | 100 | 100 | 100 |
樣本 | 50 |
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1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液 |
| 50 |
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蒸餾水 |
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| 50 |
混勻后,37℃水浴30min
混勻, 540nm下測定各管吸光值
注意:標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次。
β-GD活性計算:
(1)按樣本鮮重計算:
單位定義:每小時每g鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。
β-GD(μmol/h/g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=2×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算:
單位定義:每小時每mg組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。
β-GD(μmol/h /mg prot)= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=2×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度, 1μmol/mL;V1:加入樣本體積:0.05mL;V2:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
關(guān)鍵字: β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuron;β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuron;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域,提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度,深得新老客戶厚愛,本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神,堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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