β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）試劑盒說明書

                               分光光度法50管/48樣

注   意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）試劑盒測定意義：

β-GD廣泛存在于動物組織中，是一種參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程的基質(zhì)降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。該酶在肝細(xì)胞中含量較高。此外在胃癌組織中含量豐富，測定胃液β-GD活性對于研究胃癌具有重要的意義。

測定原理：

β-GD催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸產(chǎn)生游離的酚酞，通過測定苯酚含量反應(yīng)該酶活性高低。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體5mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入5mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑三：液體37.5mL×1瓶，4℃保存；

試劑四：1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液10mL，4℃保存；

樣品測定的前處理：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

β－葡萄糖醛酸苷酶（β-glucuronidase，β-GD）試劑盒測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測定（在EP管中加入下列試劑）

     混勻后，37℃水浴30min

混勻， 540nm下測定各管吸光值

注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次。

β-GD活性計算：

（1）按樣本鮮重計算：

單位定義：每小時每g鮮重樣品中催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。

β-GD（μmol/h/g 鮮重）= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(W×V1÷V2)÷T=2×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計算：

單位定義：每小時每mg組織蛋白催化產(chǎn)生 1μmol酚酞的量為一個活力單位。

β-GD（μmol/h /mg prot）= (C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷(V1×Cpr)÷T=2×（A測定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr

C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度， 1μmol/mL；V1：加入樣本體積：0.05mL；V2：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，0.5h；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。