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線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒,MDHm
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線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒

價(jià)格 1500
包裝 1盒
最小起訂量 1盒
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-25
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產(chǎn)品詳情

中文名稱(chēng):線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒英文名稱(chēng):MDHm
CAS:保存條件: 2-8℃
產(chǎn)品類(lèi)別: 試劑盒 生化試劑盒
2024-12-25 線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒 MDHm 1盒/1500RMB 1500 2-8℃ 試劑盒 生化試劑盒

線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶MDHm試劑盒說(shuō)明書(shū)

                              分光光度法50管/48樣


    意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒測(cè)定意義:

MDH EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDHTCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋(píng)果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴(lài)的MDHNADP-依賴(lài)的MDH,細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。


測(cè)定原理:

MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。


自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。


試劑的組成和配制:

試劑一液體50mL×1瓶,-20保存;

試劑二液體10mL×1瓶,-20保存;

試劑三液體1mL×1-20保存;

試劑、液體50 mL×1瓶,在4保存;

試劑、粉劑×2支,-20保存;臨用前300μL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑、粉劑×2支,-20保存;臨用前300μL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。


線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒樣本測(cè)定的準(zhǔn)備:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

① 稱(chēng)取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一10uL 試劑三,冰浴勻漿器或研缽勻漿。

② 將勻漿液于600g4℃離心5min。

③ 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g4℃離心10min。

④ 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的MDH(此步可選做)。

⑤ 在步驟④中的沉淀加入200uL試劑二2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體MDH測(cè)定。

 

 

 

 

 

測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 試劑四在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上。

3、 操作表:

試劑名稱(chēng)μL

測(cè)定孔

樣本

20

試劑

760

試劑

10

試劑

10

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1反應(yīng)1min的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2

計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。


MDHm活力單位的計(jì)算:

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

MDHmnmol/min/mg prot=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

MDHmnmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷ε×d×109W× V÷V樣總)÷T =1299×ΔA÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

MDHmnmol/min/104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×1092000×V÷V樣總)÷T=0.65×ΔA

V反總:反應(yīng)體系總體積,8×10-4 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;W:樣質(zhì)量,gCpr樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;2000:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),2000萬(wàn)。


關(guān)鍵字: 線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒;線粒體蘋(píng)果酸脫氫酶(MDHm)試劑盒;

公司簡(jiǎn)介

上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域,提供科研類(lèi)試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度,深得新老客戶厚愛(ài),本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神,堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。 公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí),也建立了一套集技術(shù)支持,物流售后服務(wù)等多部門(mén)聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系,努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶,雅吉生物的試劑盒,在國(guó)內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用,深受廣大科研人員好評(píng),先后在權(quán)威雜志文章中被引用。 本公司鄭重承諾:質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。
成立日期 2011-04-17 (14年) 注冊(cè)資本 50.000000萬(wàn)人民幣
員工人數(shù) 50-100人 年?duì)I業(yè)額 ¥ 100萬(wàn)以內(nèi)
主營(yíng)行業(yè) 抗體,抗體 經(jīng)營(yíng)模式 試劑,定制,試劑,定制
  • 上海雅吉生物科技有限公司
VIP 3年
  • 公司成立:14年
  • 注冊(cè)資本:50.000000萬(wàn)人民幣
  • 企業(yè)類(lèi)型:有限責(zé)任公司(自然人投資或控股)
  • 主營(yíng)產(chǎn)品:抗體,細(xì)胞,生物試劑等
  • 公司地址:上海市閔行區(qū)元江路5500號(hào)第 1幢5658室
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