甜菜堿（Betaine）含量試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
甜菜堿（Betaine）含量試劑盒測定意義：
甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。
測定原理：
甜菜堿在強酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰，測定525nm處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。
自備實驗用品及儀器：
天平、離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、乙醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體30mL×1瓶 ，4℃保存；
試劑一：粉劑3瓶4℃保存，臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加40mL蒸餾水溶解，加780μL濃鹽酸調(diào)pH為1。
試劑二：99%乙醚，自備。取無水乙醚99mL，加入蒸餾水1mL，混勻。
試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。
甜菜堿提?。?/span>
取烘干后過40目篩的樣品約0.04g，加1.6mL水，置于60℃提取30min，期間不斷震蕩。再加入400μL提取液，混勻后10000g，25℃，離心10min，取上清液。
甜菜堿（Betaine）含量試劑盒測定操作表：
1、 分光光度計預熱30min，調(diào)節(jié)波長至525nm。
2、操作表
| 標準管 | 測定管 |
上清液（μL） |
| 1200 |
蒸餾水（μL） | 1200 |
|
試劑一（μL） | 2000 | 2000 |
充分混勻，4℃中反應(yīng)2h，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清 |
試劑二（μL） | 2000 | 2000 |
混勻，12000rpm，25℃，離心10min，棄上清。置于通風櫥使殘余乙醚自然揮發(fā)干凈 |
試劑三（μL） | 1200 | 1200 |
震蕩使沉淀充分溶解，取1mL于1mL玻璃比色皿，試劑三調(diào)零，記錄標準管和測定管525nm處吸光值A測定與A空白。ΔA=A測定管-A空白管。 |
甜菜堿含量計算公式：
標準條件下測定的回歸方程為y = 1.004x + 0.0057，R2 = 0.9993；x為甜菜堿濃度（mg/mL），y為吸光值。
甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷1.004× V標準÷(V樣÷V樣總×W)
=1.99×（ΔA-0.0057）÷W
V標準：標準品體積，1.2mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，1.2mL；V樣總：加入提取液體積，2mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項：
1、 試劑一配制時pH嚴格控制為1，否則會導致反應(yīng)不完全，配制后4℃只能穩(wěn)定幾個小時，配制后盡快使用。
2、 試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護工作。
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學、免疫學、微生物學、細胞學等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風生物”、“彩佑實業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽”的精神，堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時、服務(wù)周到。