單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒測定意義：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂，從而引發(fā)多種病癥。
測定原理：
MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛，進(jìn)一步氧化成酸；底物在360nm處有特征吸收峰，測定360nm光吸收下降的速率，計(jì)算MAO活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液一）進(jìn)行冰浴勻漿，10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）取上清置于冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心30min，棄上清；加入1.0 mL預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的1.0 mL 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定），取上清置于冰上待測。
3. 血清：直接測定。
測定操作表：
| 空白管 | 測定管 |
酶液（μL） |
| 100 |
試劑一（μL） | 900 | 800 |
試劑二（μL） | 100 | 100 |
混勻，1 mL玻璃比色皿，對照管調(diào)零，測定360nm處吸光值A1，然后37℃水浴60min，測定360nm處吸光值A2，△A= A1- A2。 |
注意：空白管只需測定一次。
MAO活性計(jì)算公式：
1、按蛋白含量計(jì)算
酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性（nmol/min / mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每克樣品1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性（nmol/min / g 鮮重）=×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T = 114×ΔA÷ W
3、按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每104 個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性（nmol/min / 104 cell）= ×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T
= 114×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
4、按照液體體積計(jì)算
酶活定義：37℃，pH7.6時(shí)，每升血清1min內(nèi)轉(zhuǎn)化1nmol底物的酶量為一個(gè)酶活單位。
DAO活性（nmol/min /L）=×V反總÷V樣=114000×ΔA
ε：底物摩爾消光系數(shù)，1.46 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，60min，W：樣本質(zhì)量，g
單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒注意事項(xiàng)：
1、吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。
關(guān)鍵字： 單胺氧化酶（Monoamine Oxid;單胺氧化酶（Monoamine Oxid;
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