果糖1,6-二磷酸醛縮酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，FBA）試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意 ：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
果糖1,6-二磷酸醛縮酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，F(xiàn)BA）試劑盒測定意義：
植物葉綠體中果糖1,6-二磷酸醛縮酶是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反應(yīng)，在各種逆境脅迫下表現(xiàn)不同的響應(yīng)。
測定原理：
果糖1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮，在磷酸丙糖異構(gòu)酶和α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙酮生成NAD和α-磷酸甘油，340nm處吸光值的變化可反映果糖1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、震蕩儀、研缽、紫外分光光度計(jì)、1 mL石英比色皿。
試劑組成和配制：
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加5 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：液體×1瓶，4℃避光保存；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
酶液提?。?/span>
①總FDA酶提取：建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定。
②胞漿和葉綠體FDA酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測定胞漿FDA酶活性，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，8000g離心10min，取上清測定葉綠體中FDA酶活性。
建議測定總FDA酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FDA，則按照步驟②提取粗酶液。
果糖1,6-二磷酸醛縮酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，F(xiàn)BA）試劑盒測定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 取1mL石英比色皿，依次加入500μL試劑一，100μL試劑二，100μL試劑三，100μL試劑四，100μL試劑五，100μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2
計(jì)算公式：
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
FDA（nmol/min /mg prot）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
FDA（nmol/min /g 鮮重）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
FDA（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T
= 321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按照液體體積計(jì)算
酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
FDA（nmol/min /mL）= ΔA÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T=321.54×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
關(guān)鍵字： 果糖1,6-二磷酸醛縮酶（Fructos;果糖1,6-二磷酸醛縮酶（Fructos;
上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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