α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50管/24樣
注 意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)試劑盒測(cè)定意義:
淀粉酶負(fù)責(zé)水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機(jī)地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時(shí)使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。
測(cè)定原理:
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而測(cè)定α-淀粉酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:25mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需90℃加熱溶解后再用;
試劑二:20mL×1瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。
α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)試劑盒粗酶液提取:
組織:稱取0.1~0.2g樣本(建議稱取約0.1g樣本),加1 mL蒸餾水勻漿;將勻漿倒入離心管中,在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,25℃離心10min,吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即為淀粉酶原液。
血清(漿):直接檢測(cè)。
操作步驟和加樣表(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540 nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 試劑一或試劑二40℃預(yù)熱10min
3、測(cè)定步驟
試劑(μL) | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
α淀粉酶原液 | 250 | 250 |
70℃水浴15min左右,冷卻
蒸餾水 | 250 | |
試劑二 | 250 |
在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min
試劑一 | 500 | 500 |
混勻,95℃水浴5min,冷卻, 540nm處讀取對(duì)照管和測(cè)定管吸光度,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。
α-淀粉酶(α-amylase,α-AL)試劑盒活性計(jì)算:
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778; x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、α淀粉酶活性
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活力單位。
α淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1.075×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(ΔA+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T=0.1075×(ΔA+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)樣本中α淀粉酶活性計(jì)算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1mg還原糖定義為1個(gè)酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA+0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(ΔA+0.1778)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.5mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.25 mL;V樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,5min。
成立日期 | 2011-04-17 (14年) | 注冊(cè)資本 | 50.000000萬(wàn)人民幣 |
員工人數(shù) | 50-100人 | 年?duì)I業(yè)額 | ¥ 100萬(wàn)以內(nèi) |
主營(yíng)行業(yè) | 抗體,抗體 | 經(jīng)營(yíng)模式 | 試劑,定制,試劑,定制 |
產(chǎn)品名稱 | 價(jià)格 | 公司名稱 | 報(bào)價(jià)日期 | |
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¥120.00 |
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2024-12-25 | |
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武漢吉業(yè)升化工有限公司
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