雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒說明書
分光光度法 50T/48S
注 意 ： 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定，確保蛋白濃度在1～10mg/ml范圍內(nèi)。
測定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒測定原理：
強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動物材料。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、可見分光光度計、移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1瓶，5 mg/mL，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：
1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））
冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）
3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μL蒸餾水，1000μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A空白管。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μL標(biāo)準(zhǔn)液，1000μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540 nm比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測定管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μL待測液，1000μL試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A測定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒樣品中蛋白質(zhì)濃度計算公式：
C待測（mg/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
=5×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)
注意事項：
1.樣品蛋白濃度須在1~10mg/ml范圍內(nèi)，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml須做相應(yīng)稀釋。因此測定前用1~2個樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在1~10mg/ml范圍內(nèi)。
2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用BCA蛋白質(zhì)含
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
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