AR42J細胞在腎上腺皮質(zhì)激素刺激下可誘導(dǎo)出外分泌活性,并伴有廣泛的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)重構(gòu)。
一、細胞基本屬性
細胞名稱:大鼠胰腺外分泌細胞
細胞別稱:AR42J
細胞貨號:SNL-207
細胞種屬:大鼠
生長情況:懸浮+部分貼壁
培養(yǎng)條件:1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml售后
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定)
傳代方法:
1.輕輕吸走培養(yǎng)上清,留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面吹下細胞;
2.混勻細胞,收集細胞培養(yǎng)基,900rpm離心3-5min,棄上清;
3.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
4.補足完全培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
注意事項 半貼壁細胞會附著瓶底,但貼壁不緊,輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細胞面就會脫落,不需要胰酶消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng),更適合吹打細胞操作,吹打細胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
三、細胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法:
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞;
2.將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管;
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項:凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案
Tips:
1.細胞懸浮生長,部分貼壁呈上皮狀,傳代時貼壁部分可以不要,也可以繼續(xù)培養(yǎng)用于收集懸浮細胞。;
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