"WiDr:人結直腸癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
細胞生長:貼壁
絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細胞。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37℃消化。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育。不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化HAO了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質材料的附著已經消失了,細胞之間的附著也已經消失了,細胞已經獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常HAO,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個性。如果和標準形態(tài)不一致,那可能是自己沒消化HAO導致的,但如果消化方法正確,仍然成片分布,甚至完全吹打成單細胞懸液,貼壁后仍然成片分布,這是細胞的性,是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布,你的細胞之后會對你越來越不HAO。
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
PANC0813細胞類似產品::293c18細胞、P3/ag細胞、BRL-3A細胞
NCI-H250細胞類似產品::H-295細胞、H1341細胞、NCI-H226細胞
MDA-MB-231 #4175細胞類似產品::REC 1細胞、EBNA293細胞、ROS17/28細胞
X63-Ag8-653細胞類似產品::CemT4細胞、C-4-I細胞、NCIH1155細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
細胞背景資料:結腸癌;女性
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細胞形態(tài):上皮細胞樣
H719細胞類似產品::CAL-78細胞、MV411細胞、HuT 78細胞
MOPC細胞類似產品::HS-294細胞、GM3570細胞、C57 Mouse Tumor 64細胞
PATU-S細胞類似產品::SHZ-88細胞、NCI-460細胞、SW620細胞
細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:傳代培養(yǎng):是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉移,接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細胞,可根據(jù)不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代,部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代,或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。實驗步驟:①入無菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;②倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預熱;③超凈臺臺面應整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;④打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右,關閉紫外燈,打開風機清潔空氣除去臭氧;⑤點燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內;⑥將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上;⑦倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,小培養(yǎng)瓶用量酌減,蓋HAO瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養(yǎng)瓶,使細胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,反復吹打消化HAO的細胞使其脫壁并分散,再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋HAO瓶蓋,適度擰緊后稍回轉,以利于CO2的進入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱;⑩對懸浮培養(yǎng)細胞,步驟7-9不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁
貼壁細胞傳代:去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞,顯微鏡下觀察,待細胞變圓,細胞間隙明顯,部分細胞剛開始脫離瓶壁,加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化,將細胞小心吹打下來,1000rpm/min室溫離心5min;棄上清,細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代:一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,將細胞懸液移入離心管中,1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清,細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態(tài)良HAO,當補液時,需避免反復吹打。
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上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。