"T-HEECs:人正常食管上皮復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關(guān)重要的考驗。很多同學(xué)都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

624-mel細胞類似產(chǎn)品：：HSC-5 [Human skin squamous cell carcinoma]細胞、aNK細胞、NUGC-2細胞

SKUT-1細胞類似產(chǎn)品：：H-498細胞、Kit225細胞、Ra #1細胞

OCI-AML-3細胞類似產(chǎn)品：：HS-294T細胞、MHCC-97細胞、UMUC3細胞

NCIH548細胞類似產(chǎn)品：：COLO 679細胞、HGC27細胞、NCI-H838細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：食管；上皮細胞；女性

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細胞形態(tài)：上皮細胞樣

BpRc1細胞類似產(chǎn)品：：hTERT-HME1細胞、H1048細胞、IM-9細胞

SK-N-AS細胞類似產(chǎn)品：：FDCP-1細胞、NCI N87細胞、CCRF細胞

BCECs細胞類似產(chǎn)品：：PANC403細胞、MCF-7/ADR-RES細胞、MDA-MB 468細胞

細胞培養(yǎng)實驗基本操作：①進無菌室前要徹底洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用７５%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。⑥操作完畢后應(yīng)整理HAO工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系的傳代工作應(yīng)由兩人獨立進行；無菌室的徹底消毒①新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比，Zui大的YOU點是便宜，而且可以稀釋５０倍用，而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。②甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉，熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含３７－４０%的甲醛。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當補液時，需避免反復(fù)吹打。

Hs 746.T細胞類似產(chǎn)品：：SK_N_BE2C細胞、U87 MG細胞、Pt K2 (NBL-5)細胞

Human podocyte細胞類似產(chǎn)品：：L(TK-)細胞、ECC12細胞、Daoy細胞

Glioma-261細胞類似產(chǎn)品：：BHP 10-3細胞、H2141細胞、COLO 205細胞

PC10細胞類似產(chǎn)品：：MIMVEC細胞、BNCL2細胞、NCI-H2106細胞

MHCC97H細胞類似產(chǎn)品：：Melanoma 14細胞、M-O7e細胞、H2030細胞

JURKAT E-6.1細胞類似產(chǎn)品：：MEL細胞、NCIH647細胞、Balb/c3T3細胞

IEC 18細胞類似產(chǎn)品：：H865細胞、alpha-TC1-6細胞、CL-40細胞

YES 2細胞類似產(chǎn)品：：SNU520細胞、Factor Dependent Continuous-Paterson 1細胞、SUM-159細胞

BpRcl細胞類似產(chǎn)品：：HTR-8/SV neo細胞、NCI-H508細胞、ARH 77細胞

BRL3A細胞類似產(chǎn)品：：WEHI-164細胞、NTera-2D1細胞、COLO-205細胞

Kasumi 1細胞類似產(chǎn)品：：Nb2-11細胞、PC.3細胞、SK_N_FI細胞

PA1細胞類似產(chǎn)品：：Nb2a細胞、EJ-1細胞、K-562細胞

RFL 6細胞類似產(chǎn)品：：BT 325細胞、HEC1-A細胞、SUM52細胞

ECC-12細胞類似產(chǎn)品：：RCC10細胞、SCL1細胞、Lec1細胞

Walker256-TC細胞類似產(chǎn)品：：WM239細胞、SW-954細胞、HN4細胞

Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞類似產(chǎn)品：：EFM19細胞、DHL-2細胞、U937細胞

Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞類似產(chǎn)品：：EFM19細胞、DHL-2細胞、U937細胞

MDST8細胞類似產(chǎn)品：：NCIH2286細胞、A-704細胞、MBdSMC細胞

H508細胞類似產(chǎn)品：：ADR-RES細胞、U 138 MG細胞、H-1819細胞

MD Anderson-Metastatic Breast-436細胞類似產(chǎn)品：：GLRK 13細胞、EJ1細胞、HTR-8/SVneo細胞

Jiyoye(P-2003)細胞類似產(chǎn)品：：Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞、ECC1細胞、Tb 1 Lu (NBL-12)細胞

HEEpiC細胞類似產(chǎn)品：：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-6細胞、BE(2)-C細胞、JCA1細胞

3T3NIH細胞類似產(chǎn)品：：LX-2細胞、HCC1395細胞、OV1-P細胞

C3H 10T1/2細胞類似產(chǎn)品：：CA 46細胞、H2126細胞、HCC44細胞

T-HEECs:人正常食管上皮復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

H-1435細胞類似產(chǎn)品：：YD15細胞、H-2135細胞、OCI/AML2細胞

Panc 10.05細胞類似產(chǎn)品：：U373-MG細胞、CMT-93細胞、SNUC2A細胞

NB-19細胞類似產(chǎn)品：：HREC細胞、PGLH7細胞、F98細胞

HPF細胞類似產(chǎn)品：：2B4-L細胞、SVHUC細胞、Hepatoma-22細胞

McArdle RH-7777細胞類似產(chǎn)品：：WB F344細胞、786.O細胞、OVCAR-420細胞

RKOAS451細胞類似產(chǎn)品：：T2(174 x CEM.T2)細胞、H-2141細胞、H-820細胞

NCI-SNU-423細胞類似產(chǎn)品：：CNE2細胞、JKT-1細胞、PMVEC細胞

K422細胞類似產(chǎn)品：：N2a細胞、DHL-8細胞、Chang Cells細胞

HEK 293細胞類似產(chǎn)品：：WM266細胞、PaTu8988s細胞、LN382細胞

DH-82細胞類似產(chǎn)品：：PANC-03-27細胞、CMT167細胞、BC-009細胞

PF-382細胞類似產(chǎn)品：：HuT-102細胞、Hs888 Lu細胞、SNU-398細胞

H820細胞類似產(chǎn)品：：CHP-100細胞、PC 61細胞、IAR-20細胞

HOS/MNNG細胞類似產(chǎn)品：：H-2347細胞、Centre Antoine Lacassagne-51細胞、JROECL19細胞

L 1210細胞類似產(chǎn)品：：BHP10-3細胞、NCI-SNU-5細胞、NCI-H2073細胞

OE19細胞類似產(chǎn)品：：Panc-10.05細胞、BT 20細胞、DH82細胞

NTera-2D1細胞類似產(chǎn)品：：HuH7細胞、NALM-6-M1細胞、TKB1細胞

Psi-2 DAP細胞類似產(chǎn)品：：HFT 8810細胞、SJRH 30細胞、HCC1954 BL細胞

DMS-114細胞類似產(chǎn)品：：MDAMB-231細胞、253J細胞、293AD細胞

OVCAR 420細胞類似產(chǎn)品：：Panc 02.03細胞、GM01232細胞、Hs675T細胞

CEM/0細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1734細胞、GM01232E細胞、NTera-2D1細胞

CL34細胞類似產(chǎn)品：：HuP-T4細胞、RCCJF細胞、OCI AML3細胞

JM-1細胞類似產(chǎn)品：：RPMI No. 1846細胞、Clone Y-1細胞、H7721細胞

H526細胞類似產(chǎn)品：：PLCPRF5細胞、HMy2.CIR細胞、GTL-16細胞

T-ALL1細胞類似產(chǎn)品：：RS(4;11)細胞、HFE-145細胞、SKMel-5細胞

NIH 3T3細胞類似產(chǎn)品：：AR42J細胞、KYSE-150細胞、RPMI-2650細胞

HFLS-RA細胞類似產(chǎn)品：：Evsa-T細胞、J774 A.1細胞、RAW 264.7細胞

KU-812F細胞類似產(chǎn)品：：E304細胞、LAN-6細胞、BpRc1細胞

LM(TK-)細胞類似產(chǎn)品：：HCC0015細胞、373 MG細胞、B/C3T3細胞

OCM-1細胞類似產(chǎn)品：：BV-173細胞、GM03320D細胞、Mv1.Lu細胞

NCI-SNU-119細胞類似產(chǎn)品：：NRK clone 49F細胞、MDAMB134細胞、H-2172細胞

EB1細胞類似產(chǎn)品：：Colo320細胞、CCFSTTG1細胞、J774A1細胞

NHDF細胞類似產(chǎn)品：：CAL 33細胞、UCLA-SO-M21細胞、D341 Med細胞

MDAMB175VII細胞類似產(chǎn)品：：HCV-29細胞、CT-26細胞、WM451細胞

NCIH2107細胞類似產(chǎn)品：：H295R細胞、CD-18細胞、Hs 822.T細胞

GM02132細胞類似產(chǎn)品：：SNU-620細胞、VMM5A細胞、A549ATCC細胞

MD Anderson-Metastatic Breast-175-VIII細胞類似產(chǎn)品：：LM TK negative細胞、PC3細胞、X63-Ag 8.6.5.3細胞

NBL-12細胞類似產(chǎn)品：：PT-K75細胞、NPC-TW039細胞、X63-Ag8-653細胞

Glioma-261細胞類似產(chǎn)品：：BHP 10-3細胞、GBC-SD細胞、OVCA 420細胞

Becker細胞類似產(chǎn)品：：WI38細胞、L cell line細胞、PCI:SG231細胞

NPC-TW039細胞類似產(chǎn)品：：Madison lung細胞、HCC-1954細胞、Ramos (RA)細胞

SW756細胞類似產(chǎn)品：：UCLA-SO-M14細胞、7860細胞、CAL120細胞

GM637細胞類似產(chǎn)品：：OCI-Ly19細胞、DMS273細胞、H865細胞

NCI-1155細胞類似產(chǎn)品：：GM05372細胞、MCF7-GFP細胞、102PT細胞

H508細胞類似產(chǎn)品：：ADR-RES細胞、U 138 MG細胞、H-1819細胞

2T細胞類似產(chǎn)品：：HEK-293A細胞、rUCMSCs細胞、NCM460細胞

Hs821T細胞類似產(chǎn)品：：ATC241細胞、HCC2279細胞、MZ-CRC-1細胞

WERI細胞類似產(chǎn)品：：OV3121細胞、AHH1細胞、HAC-84細胞

MC-38細胞類似產(chǎn)品：：OE-21細胞、SUDHL8細胞、HeLa S3細胞

7860細胞類似產(chǎn)品：：HPAF II細胞、IMR90細胞、RS411細胞

UCLA RO-81A-1細胞類似產(chǎn)品：：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2細胞、Hep3B細胞、M14-MEL細胞

DSL6A/C1細胞類似產(chǎn)品：：HSC-4細胞、SW 900細胞、LK-2細胞

SC1細胞類似產(chǎn)品：：H-1105細胞、3AO細胞、RH30SJ細胞

HCC-1937細胞類似產(chǎn)品：：RBMEC細胞、OE21細胞、MDAMB330細胞

UACC-893細胞類似產(chǎn)品：：HGC27細胞、NCIH810細胞、NB19細胞

HEC251細胞類似產(chǎn)品：：CL1-0細胞、IHH4細胞、MDA453細胞

EVSA/T細胞類似產(chǎn)品：：OCI/AML-5細胞、NCI-H196細胞、A9細胞

Capan 1細胞類似產(chǎn)品：：CAOV3細胞、BHP 10-3細胞、NCI-SNU-5細胞

GM04154B細胞類似產(chǎn)品：：CG-4細胞、HCV-29細胞、SNU-354細胞

GM04154B細胞類似產(chǎn)品：：CG-4細胞、HCV-29細胞、SNU-354細胞

SK-HEP-1細胞類似產(chǎn)品：：SKM-1細胞、MC3T3-E1細胞、rRMECs細胞

HuPT3細胞類似產(chǎn)品：：LU165細胞、624-mel細胞、COLO-738細胞

RERFLCMS細胞類似產(chǎn)品：：DI TNC-1細胞、Murine Leydig Tumor Cell line-1細胞、CV-1 in Origin Simian-1細胞

C42細胞類似產(chǎn)品：：LUDLU-1細胞、1E8-H細胞、PLA 802細胞

Rat Fetal Lung-6細胞類似產(chǎn)品：：JB6 [Mouse]細胞、HUV-EC-C細胞、SK-MEL-2細胞

H716細胞類似產(chǎn)品：：Colo16細胞、BRL 3A細胞、NCI-H1666細胞

NL20SV細胞類似產(chǎn)品：：MA-c細胞、NCI-SNU-398細胞、Jiyoye細胞

DMS 153細胞類似產(chǎn)品：：Hs852T細胞、CHO細胞、T/G HA VSMC細胞

GM02132C細胞類似產(chǎn)品：：HR-8348細胞、GLC82細胞、MC57G細胞

HC11細胞類似產(chǎn)品：：MM6細胞、HEC-251細胞、NUGC4細胞

MFHL-2細胞類似產(chǎn)品：：Normal fibroblast-10細胞、KLN205細胞、H-2198細胞

DHL6細胞類似產(chǎn)品：：KASUMI6細胞、C22細胞、LM(TK-)細胞

KP-N-YN細胞類似產(chǎn)品：：SW-954細胞、Bovine ENDometrial cells細胞、COV504細胞

NCI-H69C細胞類似產(chǎn)品：：SK.MEL.28細胞、KNS42細胞、HEK;293細胞

Roswell Park Memorial Institute 6666細胞類似產(chǎn)品：：BC-019細胞、UM2細胞、LU-65M細胞

LLC細胞類似產(chǎn)品：：SK-RC 52細胞、Eca 109細胞、OCI-AML-2細胞

RWPE-1細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H2073細胞、EFM192A細胞、TE3細胞

Hs 695.T細胞類似產(chǎn)品：：HSC6細胞、IBRS-2細胞、CHL-11細胞

786O細胞類似產(chǎn)品：：OCI-Ly 1細胞、NCI/ADR-RES細胞、NCI-H441-4細胞

bEND.3細胞類似產(chǎn)品：：ATDC5細胞、KP-N-NS細胞、HES [Human embryonic skin fibroblast]細胞

RT4-D6-P2T細胞類似產(chǎn)品：：CAKI.1細胞、H-2196細胞、AR-42J細胞

Lung cancer-1/squamous細胞類似產(chǎn)品：：UM-UC-3細胞、QBC-939細胞、H220細胞

343 MG細胞類似產(chǎn)品：：SUD6細胞、alpha-TC1.6細胞、H-747細胞

T-HEECs:人正常食管上皮復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

NOMO1細胞類似產(chǎn)品：：Keio University-19-19細胞、Evsa T細胞、Kit 225 K6細胞

Clone Y1細胞類似產(chǎn)品：：COR-L23/P細胞、RPE1-hTERT細胞、H1876細胞

OCILY7細胞類似產(chǎn)品：：SNU-520細胞、PT-67細胞、Hs839T細胞

NCI-SNU-886細胞類似產(chǎn)品：：SJSA-1細胞、MGC-803細胞、R 2 C細胞

SU-DHL-8細胞類似產(chǎn)品：：CII細胞、HMrSV5細胞、MCA38細胞

NCI-SNU-886細胞類似產(chǎn)品：：SJSA-1細胞、MGC-803細胞、R 2 C細胞

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