"NSC-34:鼠神經(jīng)元復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)HAO與不HAO至關(guān)重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺HAO的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣的，大家爭取做到因材施教，比如試試下面的“四步消化法”。（以難消化細胞為例），具體操作：1)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍（目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉）。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更HAO一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了）3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況把握）。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

CEM-CCRF細胞類似產(chǎn)品：：PLC-8024細胞、A7r5細胞、COLO 320HSR細胞

HEH2細胞類似產(chǎn)品：：Walker/LLC-WRC256細胞、SNU119細胞、Huh-7.5細胞

CT26-clone 25細胞類似產(chǎn)品：：MRCV細胞、Hce8693細胞、SF 539細胞

LNCaP.FGC細胞類似產(chǎn)品：：NB-19細胞、B10BR細胞、SW-1417細胞

[細胞產(chǎn)品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：神經(jīng)元

NSC-34:鼠神經(jīng)元復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

SW-1990細胞類似產(chǎn)品：：H-2342細胞、NB19-RIKEN細胞、SKNEP細胞

H1299細胞類似產(chǎn)品：：C-4-I細胞、Jurkat細胞、T8細胞

VMCUB-1細胞類似產(chǎn)品：：Huh 7.5.1細胞、NB1RGB細胞、NOR10細胞

培養(yǎng)細胞的凍存及復(fù)蘇：細胞低溫凍存是培養(yǎng)室常規(guī)工作和通用技術(shù)。細胞凍存在-１９６℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復(fù)蘇的原則是慢凍快融?！緝龃婕毎浚?選對數(shù)增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前１d換液；２)按常規(guī)方法把培養(yǎng)細胞制備成懸液，計數(shù)，使細胞密度達５×１０／ml左右密度，離心，去上清；３)加入配制HAO的凍存液(培養(yǎng)液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養(yǎng)液中加入保護劑１０％二甲基亞砜(DMSO)或甘油，可使冰點降低，使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外；４)分裝于無菌凍存管中，每管加１.５m懸液；５)旋HAO凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做HAO標記；６)凍存：在殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min時間內(nèi)，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內(nèi)水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應(yīng)戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。【復(fù)蘇細胞】１)從罐中取出凍存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不時搖動，使其急速融化，３０～６０s內(nèi)完成；３)凍存管用７０％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加１０ml培養(yǎng)液；４)低速離心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培養(yǎng)液洗一次；５)用培養(yǎng)液適當稀釋后，裝入培養(yǎng)瓶３７℃培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液后，繼續(xù)培養(yǎng)。以后仍按常規(guī)進行培養(yǎng)。凍存細胞數(shù)量要充分，密度應(yīng)達到１０／ml，在融后稀釋２０倍時，仍能保持５×１０／ml數(shù)量。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

NSC-34:鼠神經(jīng)元復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長特性：貼壁

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當補液時，需避免反復(fù)吹打。

HS766T細胞類似產(chǎn)品：：CTLL(2)細胞、HMO6細胞、PZ-HPV-7細胞

MCF 7B細胞類似產(chǎn)品：：J-111細胞、CCD 1112SK細胞、Hep 2細胞

MDA 1386細胞類似產(chǎn)品：：LC2/Ad細胞、Huh-7.5.1細胞、HCC2185細胞

NCI-H661細胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB-231細胞、NCI H295R細胞、RetroPack PT67細胞

HME1細胞類似產(chǎn)品：：MC 116細胞、LNCaP clone FGC細胞、NCIH1666細胞

GES1細胞類似產(chǎn)品：：HEK293FT細胞、Hs832.Tc細胞、MG-HU-3細胞

B78細胞類似產(chǎn)品：：RPMI6666細胞、SW-1783細胞、ASH3細胞

OLN 93細胞類似產(chǎn)品：：Co320細胞、NCI-H2452細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16細胞

253JBV細胞類似產(chǎn)品：：BT549細胞、Hs 578.T細胞、BJ [Human fibroblast]細胞

U118-MG細胞類似產(chǎn)品：：SV-HUC細胞、brain-derived Endothelial cells.3細胞、GH 3細胞

Colo205細胞類似產(chǎn)品：：KBM-7細胞、RAG細胞、MHCC 97細胞

526mel細胞類似產(chǎn)品：：MC3T3-E1(C4)細胞、RPMI7951細胞、HD11細胞

ECV-304細胞類似產(chǎn)品：：National Medical Center-Glioma 1細胞、F56 [Human neoplasm]細胞、SDBMSC細胞

KYSE-50細胞類似產(chǎn)品：：Hs604T細胞、Calu 3細胞、SW 620細胞

SCaBER細胞類似產(chǎn)品：：QGY7703細胞、RGC6細胞、L 428細胞

KRC Y細胞類似產(chǎn)品：：L540細胞、B-95-8細胞、McG-1細胞

KRC Y細胞類似產(chǎn)品：：L540細胞、B-95-8細胞、McG-1細胞

H-1672細胞類似產(chǎn)品：：PC3M細胞、Calu-3細胞、SK MEL 28細胞

AC16 [Human hybrid]細胞類似產(chǎn)品：：SU86.86細胞、L2細胞、L23/P細胞

Line 522細胞類似產(chǎn)品：：H4IIEC3細胞、F442-A細胞、hMSC-BM細胞

HS940細胞類似產(chǎn)品：：Panc_02_03細胞、Anip-973細胞、A-9細胞

Vero細胞類似產(chǎn)品：：H3255細胞、A-375SM細胞、32D.3細胞

LY-R細胞類似產(chǎn)品：：EJ1細胞、A498細胞、Colon-26細胞

SCL1細胞類似產(chǎn)品：：NCTC clone 1469細胞、HTR-8細胞、RWPE1細胞

NSC-34:鼠神經(jīng)元復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

SW1463細胞類似產(chǎn)品：：H69細胞、SF539細胞、TE1細胞

GM01232細胞類似產(chǎn)品：：Tu212細胞、32D.3細胞、J82 COT細胞

GM02132C細胞類似產(chǎn)品：：HR-8348細胞、GLC82細胞、MC57G細胞

SUPB15細胞類似產(chǎn)品：：SN12C-PM6細胞、HRPEpiC細胞、A 2058細胞

SV40-MES13細胞類似產(chǎn)品：：KRC Y細胞、G519細胞、149 PT細胞

SHI1細胞類似產(chǎn)品：：RAG細胞、U266 Bl細胞、LIM1215細胞

AHH-1細胞類似產(chǎn)品：：Be Wo細胞、3T6-Swiss albino細胞、WEHI231細胞

HTori:3細胞類似產(chǎn)品：：KBM-7/Hap8細胞、H4-II-E細胞、SCC7細胞

HepG2/C3A細胞類似產(chǎn)品：：SUM-102PT細胞、HUCCT1細胞、LS411細胞

Tb 1-Lu細胞類似產(chǎn)品：：BNL-HCC細胞、NCIH1688細胞、GM07404D細胞

TE-4細胞類似產(chǎn)品：：GOS-3細胞、Hs 675.T細胞、SNT-8細胞

OVTOKO細胞類似產(chǎn)品：：RL-65細胞、Tn 5B1-4細胞、ketr 3細胞

Mo 59J細胞類似產(chǎn)品：：GA-10 clone 4細胞、HuTu 80細胞、Ca759細胞

LSC-1細胞類似產(chǎn)品：：NCIH1703細胞、NIH 3T3細胞、CF-1 MEF細胞

Jurkat (clone E6-1)細胞類似產(chǎn)品：：SW756細胞、CEM-CCRF (CAMR)細胞、MOLT-16細胞

GA10細胞類似產(chǎn)品：：H-322細胞、HCT116/L細胞、TK+/- (clone 3.7.2C)細胞

MOLP-2細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H157細胞、H-510A細胞、HCC-2935細胞

DOK細胞類似產(chǎn)品：：GM12878細胞、Nthy ori 3.1細胞、NB-19細胞

BCAP37細胞類似產(chǎn)品：：HSCT6細胞、HSC-3細胞、GM00637細胞

Bx-PC3細胞類似產(chǎn)品：：Hs832T細胞、HOMEC細胞、L78細胞

H660細胞類似產(chǎn)品：：TE5細胞、MC3T3-E1(C4)細胞、UPCI-SCC-90細胞

H660細胞類似產(chǎn)品：：TE5細胞、MC3T3-E1(C4)細胞、UPCI-SCC-90細胞

NCIH1650細胞類似產(chǎn)品：：MUTZ1細胞、Anip973細胞、32Dc3細胞

RKO-E6細胞類似產(chǎn)品：：RetroPack PT67細胞、HMEL細胞、SF126細胞

MDAPCa2b細胞類似產(chǎn)品：：TE3細胞、JM1細胞、Lieming Xu-2細胞

PC-9細胞類似產(chǎn)品：：CWR-22rv1細胞、V79-GalK1細胞、JJN3細胞

IEC18細胞類似產(chǎn)品：：MB231細胞、SU-DHL1細胞、QBC-939細胞

XuanWei Lung Cancer-05細胞類似產(chǎn)品：：GM 2132細胞、MFE 280細胞、R D細胞

OSK-1細胞類似產(chǎn)品：：REC-1細胞、Pro-5 Lec1.3c細胞、A-549細胞

J774細胞類似產(chǎn)品：：LuCL4細胞、SKM1細胞、H-2066細胞

PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細胞類似產(chǎn)品：：SHSY5Y細胞、QBI-293A細胞、NCIH1623細胞

JEG-3細胞類似產(chǎn)品：：H-295R細胞、GM02131A細胞、Shadyside Hospital Pittsburgh-77細胞

hTERT-HME1細胞類似產(chǎn)品：：A-673細胞、COLO 320 HSR細胞、NL-20細胞

P-19細胞類似產(chǎn)品：：HPAF/CD18細胞、184A1細胞、Spodoptera frugiperda clone 9細胞

GM05384細胞類似產(chǎn)品：：RWPE1細胞、MCF10-A細胞、SW403細胞

SK-N-BE(2)-M17細胞類似產(chǎn)品：：MAntle cell VERona-1細胞、SNU398細胞、YH細胞

OV90細胞類似產(chǎn)品：：McG-1細胞、CHP 212細胞、rUCMSCs細胞

MDA 1386細胞類似產(chǎn)品：：LC2/Ad細胞、Lewis lung carcinoma細胞、OVCAR-8/ADR細胞

OCLY8細胞類似產(chǎn)品：：PF-382細胞、Hs940T細胞、U251MG細胞

H-2023細胞類似產(chǎn)品：：Kelly細胞、NCI-H102細胞、Reh細胞

C3H10T1/2 clone8細胞類似產(chǎn)品：：COS-1細胞、MCF10A細胞、NCIH322細胞

DoTc2-4510細胞類似產(chǎn)品：：MS-751細胞、RPMI no. 8226細胞、SG231細胞

KG-1細胞類似產(chǎn)品：：SPC-A1細胞、Hs 895.T細胞、AMJ2-C8細胞

Hs-578T細胞類似產(chǎn)品：：MV411細胞、SGC-996細胞、H-2126細胞

ACHN細胞類似產(chǎn)品：：HCV 29細胞、BrCL18細胞、MDA-MB-468細胞

QGY細胞類似產(chǎn)品：：CCD-1112sk細胞、IPLB-SF-21細胞、HCC-4006細胞

UPCI-SCC090細胞類似產(chǎn)品：：L M (TK-)細胞、Panc 1細胞、NCI.H460細胞

COLO-738細胞類似產(chǎn)品：：Roswell Park Memorial Institute 1846細胞、M3 Clone M-3細胞、GM05862細胞

DAN-G細胞類似產(chǎn)品：：aNK細胞、MC 3T3-E1細胞、Ramos-2G6-4C10細胞

MDCK Type II細胞類似產(chǎn)品：：LMH細胞、Michigan Cancer Foundation-12F細胞、HEC-1A細胞

NCI522細胞類似產(chǎn)品：：MDA-kb2細胞、Epithelioma Papulosum Cyprini細胞、OCI-LY-19細胞

H292細胞類似產(chǎn)品：：SNU620細胞、BALB/3T3 clone A31細胞、NCI-H157細胞

C918細胞類似產(chǎn)品：：BNL CL.2細胞、HCT-15細胞、MDA435細胞

WERI細胞類似產(chǎn)品：：OV3121細胞、AHH1細胞、HAC-84細胞

MADB 106細胞類似產(chǎn)品：：HCT FET細胞、KMS18細胞、KMS18細胞

Y1細胞類似產(chǎn)品：：CaSki細胞、28SC細胞、LS-123細胞

Kuramochi細胞類似產(chǎn)品：：OCI-AML-4細胞、OP9細胞、SNU-C1細胞

OCIAML2細胞類似產(chǎn)品：：DF1細胞、Hk-2細胞、GM00637I細胞

OCIAML2細胞類似產(chǎn)品：：DF1細胞、Hk-2細胞、GM00637I細胞

COV-362細胞類似產(chǎn)品：：BAEC細胞、MKN45細胞、PLB 985細胞

GM03573A細胞類似產(chǎn)品：：Panc 5.04細胞、NOMO1細胞、LLC-PK1細胞

NT2D1細胞類似產(chǎn)品：：GAK細胞、NL20SV細胞、D10細胞

AHH1細胞類似產(chǎn)品：：GOTO細胞、DKMG細胞、NCI-HUT-596細胞

C-28I2細胞類似產(chǎn)品：：RPPVEC細胞、H-1650細胞、NCI-H1993細胞

Ca759細胞類似產(chǎn)品：：130T細胞、C3H10T1/2CL8細胞、OAC-P4C細胞

H-889細胞類似產(chǎn)品：：NCI-H1930細胞、NS-I/1細胞、SCL-1細胞

X63Ag8.653細胞類似產(chǎn)品：：HT144mel細胞、Leydig細胞、SW-962細胞

SK-N-AS細胞類似產(chǎn)品：：FDCP-1細胞、NCI N87細胞、CCRF細胞

CAL51細胞類似產(chǎn)品：：MDA-MB231細胞、HEK/293細胞、HSC細胞

SNU251細胞類似產(chǎn)品：：LS 513細胞、L-Wnt-3A細胞、AN3-CA細胞

Cor L51細胞類似產(chǎn)品：：NU-GC-3細胞、8305C細胞、MeSoTheliOma-211H細胞

SKLMS-1細胞類似產(chǎn)品：：NTERA2D1細胞、ASPC1細胞、16-HBE14o細胞

SVEC4-10細胞類似產(chǎn)品：：Hx147細胞、CORL88細胞、Hs 729.T細胞

HCT-8/V細胞類似產(chǎn)品：：DR2R 1610細胞、B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1細胞、TCCSUP細胞

NCIH460細胞類似產(chǎn)品：：Panc02-H0細胞、COLO-357細胞、NCIH292細胞

FRTL 5細胞類似產(chǎn)品：：RAW264細胞、OCI/AML-5細胞、NS1-Ag 4/1細胞

HRIF細胞類似產(chǎn)品：：CV-1細胞、Madin-Darby Bovine Kidney細胞、MCF-10A細胞

SW 403細胞類似產(chǎn)品：：NBL_S細胞、4T1-LUC細胞、A375細胞

MAEC細胞類似產(chǎn)品：：NCIH820細胞、TF1細胞、RBL細胞

Hut292細胞類似產(chǎn)品：：H650細胞、GM3569細胞、H-841細胞

Mel-RM細胞類似產(chǎn)品：：MDAMB436細胞、DR2R1610細胞、SCC 4細胞

HAVSMC細胞類似產(chǎn)品：：HCC95細胞、P3/NS1/1-Ag4-1細胞、Colon-38細胞

NSC-34:鼠神經(jīng)元復(fù)蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

JVM-3細胞類似產(chǎn)品：：KYSE180細胞、HEL92.1.7細胞、Tca8113細胞

293-GP細胞類似產(chǎn)品：：SHG 44細胞、SKES1細胞、Panc2.03細胞

TE-85 clone 5細胞類似產(chǎn)品：：TE6細胞、MRC-5細胞、FT-293細胞

CHL/IU細胞類似產(chǎn)品：：NCI-747細胞、DoTc2細胞、MOLP8細胞

NCI-H125細胞類似產(chǎn)品：：J82COT細胞、SKMEL28細胞、HT144-mel細胞

aTC1-6細胞類似產(chǎn)品：：WM115mel細胞、P31FUJ細胞、RCC-4細胞

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