"GL261:小鼠膠質瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
細胞生長:貼壁
凍存和復蘇的原則:慢凍快融》當細胞冷到零度以下,可以產生以下變化:細胞器脫水,細胞中可溶性物質濃度升GAO,并在細胞內形成冰晶。如果緩慢冷凍,可使細胞逐步脫水,細胞內不致產生大的冰晶;相反,結晶就大,大結晶會造成細胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復蘇過程應快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結晶。慢凍程序》1.標準程序:采用細胞凍存器》當溫度在-25℃以上時,1~2℃/min;當溫度達-25℃以下時,5~10℃/min;當溫度達-100℃時,可迅速放入液氮中。2.簡易程序:將冷凍管(管口要朝上)放入紗布袋內,紗布袋系以線繩,通過線繩將紗布袋固定于液氮罐罐口,按每分鐘溫度下降1~2℃的速度,在40min內降至液氮表面過夜,次晨投人液氮中。3.傳統(tǒng)程序:冷凍管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。細胞凍存方法:1.預先配制凍存液》(1)8%DMSO+細胞生長液(92%血清)2.取對數生長期細胞,經胰酶消化后,加入適量凍存液,用吸管吹打制成細胞懸液(1×10(6)~5×10(6)細胞/ml)。3.加入1ml細胞于凍存管中,密封后標記冷凍細胞名稱和冷凍日期。液氮長期保存。保存細胞的復蘇方法:1.快速解凍》凍存細胞從液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,輕輕搖動冷凍管,使其在1分鐘內全部融化(不要超過3分鐘)。2.解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng),24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液,以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑別敏感解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑,然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
TE5細胞類似產品::MN-9D細胞、NCI-H2066細胞、TE-5細胞
DH82細胞類似產品::IM-95細胞、J774 A1細胞、NCIH1793細胞
ECC10細胞類似產品::HCT116細胞、AM-38細胞、UPCISCC090細胞
Colo205細胞類似產品::KBM-7細胞、RAG細胞、MHCC 97細胞
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
細胞背景資料:詳見相關文獻介紹
GL261:小鼠膠質瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
細胞形態(tài):上皮細胞樣
J774 A.1細胞類似產品::SNU-1040細胞、F-81細胞、MCA205細胞
MADB106細胞類似產品::JEG3細胞、SUM159PT細胞、Hs604T細胞
NuTu 19細胞類似產品::RGE細胞、PT-K75細胞、HB611細胞
細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:傳代培養(yǎng):是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉移,接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細胞,可根據不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代,部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代,或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。實驗步驟:①入無菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;②倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養(yǎng)用液37℃下預熱;③超凈臺臺面應整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;④打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右,關閉紫外燈,打開風機清潔空氣除去臭氧;⑤點燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內;⑥將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上;⑦倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,小培養(yǎng)瓶用量酌減,蓋HAO瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養(yǎng)瓶,使細胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,反復吹打消化HAO的細胞使其脫壁并分散,再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋HAO瓶蓋,適度擰緊后稍回轉,以利于CO2的進入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱;⑩對懸浮培養(yǎng)細胞,步驟7-9不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁
一般使用trypsin-EDTA 濃度為0.25%trypsin-0.53mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02mM EDTA.2Na。消化液濃度過GAO時,易造成培養(yǎng)基中細胞碎片增多,黑渣子增多,常規(guī)細胞傳代時建議用0.05%的胰酶進行消化,對于難消化的細胞可采用0.25%胰酶進行消化,細胞密度過GAO超過80%時,采用分步消化法。胰酶儲存在-20°C,解凍在4°C進行,次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于-20°C,避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機會。胰酶消化的程度是細胞培養(yǎng)中的一個關鍵步驟:消化過度細胞碎片增多,黑渣子增多,細胞會成片脫落,嚴重影響細胞活性,并有部分細胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下,反復吹打同樣也會損傷細胞活性。不同細胞對消化液的敏感性不同,胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度,是否含EDTA,胰酶的儲存時間,胰酶的儲存溫度,是否反復凍融,消化加入的胰酶體積,消化溫度及細胞的密度有關。對于新購買的細胞,建議客戶先用低濃度的胰酶仔細去摸索一下消化時間,可每隔1分鐘鏡下觀察細胞是否變圓,記錄Zui佳消化時間,下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。
RH7777細胞類似產品::KALS-1細胞、HCC-827細胞、NCI-128細胞
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NTERA2D1細胞類似產品::MARC145細胞、MGH-U3細胞、H2195細胞
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PLA-802細胞類似產品::BC-025細胞、H1930細胞、SK-ChA1細胞
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VAESBJ細胞類似產品::ELD-1細胞、NCI-H322T細胞、MyLa2059細胞
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GL261:小鼠膠質瘤復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)
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CMT-167細胞類似產品::SCLC21H細胞、Hs-578-T細胞、SU8686細胞
EFO 27細胞類似產品::TU 686細胞、Kit-225細胞、JB6 [Mouse]細胞
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關鍵字: GL261:小鼠膠質瘤復蘇細胞(提供ST;
上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。