"SNU-761:人肝癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長：貼壁

貼壁細胞凍存注意事項：細胞凍存液需提前配制，不可直接將DMSO加入細胞懸液中；不同細胞消化時間有差異，以實際鏡檢結果為準，大部分細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可中止消化，消化時間不宜過長；應選擇匯合度80%-90%左右，細胞處于對數(shù)生長期時進行凍存操作，確保細胞凍存時狀態(tài)Zui佳，凍存密度可根據(jù)細胞性進行調整；凍存細胞保存溫度應低于-130℃，不可在-80℃長期保存。貼壁細胞凍存操作步驟：從培養(yǎng)箱中取出準備凍存的細胞；顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)并拍照記錄；酒精消毒培養(yǎng)瓶后放入安全柜中；吸去多余的培養(yǎng)基，加人2~3ml(PBS緩沖液)潤洗一次；加入1ml胰酶，放入37℃消化；消化1min左右，在顯微鏡下觀察細胞消化情況；消化完全后，加3ml完全培養(yǎng)基終止；將細胞懸液移入15ml離心管中離心，1000rpm/min（約200g）離心3-5min；吸去多余的液體，向細胞沉淀中加入適量的凍存液，輕輕吸打混勻；按比例分裝至凍存管中；貼HAO標簽后放入梯度凍存盒中；將凍存盒放入-80℃，降溫過夜后，移入液氮中保存。貼壁細胞凍存實驗準備事項：將15mL離心管、凍存管、PBS緩沖液、移液管、電動移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒滅菌；細胞完全培養(yǎng)基、0.25%胰酶-0.02%EDTA、細胞凍存液等從4℃冰箱中取出后，復溫至室溫，備用；程序降溫盒復溫至室溫備用。

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

624mel細胞類似產品：：COLO206細胞、K-562細胞、HUT-28細胞

Tu 177細胞類似產品：：KP-4細胞、NCI-SNU-1細胞、H-82細胞

SCC 15細胞類似產品：：VeroC1008細胞、NCI-H522細胞、MV4-11細胞

C32r細胞類似產品：：NB19細胞、HEI193細胞、SF763細胞

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

SNU-761:人肝癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

NCI-H2198細胞類似產品：：Ca761細胞、OVCAR5細胞、DSL6A/C1細胞

MDA134細胞類似產品：：RBL 1細胞、H-1993細胞、MDCK細胞

UCLA SO M21細胞類似產品：：MAVER-1細胞、Mono Mac 6細胞、SF-295細胞

細胞培養(yǎng)方面注意的幾點：無菌意識要強：實驗進行前，超凈臺以紫外燈照射３０分鐘滅菌，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟超凈工作臺風扇運轉數(shù)分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以７０%ethanol擦拭無菌操作抬面。無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時放置，其它個人實驗用品用完應立即拿出。實驗用品以７０%乙醇擦拭后才帶入無菌操作臺內。實驗操作應在中央無菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約４５°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻可能對相同的細胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當時培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，有文獻就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實驗目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。瓶裝血清一定要逐步解凍:４℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。熱滅活是指５６℃，３０分鐘加熱已完全解凍之血清。水浴鍋升到５６℃后，將血清放入，待溫度升GAO到５６℃后計時，一般５分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質。注意更換新血清(包括不同批次)對細胞的影響。

細胞傳代方法：１：２傳代

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

SNU-761:人肝癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

細胞生長特性：貼壁或懸浮，詳見細胞說明書部分

貼壁細胞傳代：去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右完全培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000rpm/min室溫離心5min；棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。懸浮細胞傳代：一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min 室溫離心5min。棄上清，細胞沉淀用完全培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶（視細胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培養(yǎng)液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良HAO，當補液時，需避免反復吹打。

P3.times.63 Ag8.653細胞類似產品：：KYSE-520細胞、NCI.H460細胞、MM1-S細胞

Pfeiffer細胞類似產品：：L-Wnt-3A細胞、OCILY7細胞、MFHL-2細胞

HEC-1A細胞類似產品：：Oka-C1細胞、SK Col 1細胞、OEC33細胞

Cates 1B細胞類似產品：：KP2細胞、67NR細胞、A549細胞

TM3細胞類似產品：：HRCEC細胞、NS653細胞、HSC-1細胞

A-204細胞類似產品：：COLO 205細胞、P31/FUJ細胞、NCI H345細胞

HCC202細胞類似產品：：NKM1細胞、WEHI 164 TC細胞、SUDHL16細胞

HepG2細胞類似產品：：Centre Antoine Lacassagne-148細胞、Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5細胞、JKT1細胞

PaTu-8988s細胞類似產品：：8305-C細胞、EBC-1/original細胞、SCC154細胞

526-mel細胞類似產品：：MMAc-Serum Free細胞、LLC-MK2細胞、JROECL 19細胞

NCI-H510A細胞類似產品：：G-292 clone A141B1細胞、H209細胞、CL1.0細胞

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Calu3細胞類似產品：：PY8119細胞、CV1細胞、TM3細胞

OVCA5細胞類似產品：：PANC-10-05細胞、ML2細胞、MDA-MB-134-VI細胞

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D324細胞類似產品：：IMR32細胞、NCI-H211細胞、RMC-1細胞

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SKCO1細胞類似產品：：PC3M-1E8細胞、NG108-15細胞、RBVEC細胞

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SNU-761:人肝癌復蘇細胞(提供STR鑒定圖譜)

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SK-CO-1細胞類似產品：：H-1734細胞、NCI-H1437細胞、CV 1細胞

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NCI-H1703細胞類似產品：：LC1sq細胞、NH-6細胞、OVCAR3細胞

J111細胞類似產品：：NCIH650細胞、Hs819T細胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-14細胞

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細胞

TO 175.T細胞類似產品：：RAW264.7細胞、J774 A.1細胞、SKCol1細胞

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NIH:OVCAR-8細胞類似產品：：X63-Ag8.653細胞、QBI-HEK 293A細胞、IEC-6細胞

U-937細胞類似產品：：MPC 11細胞、JM細胞、Epstein-Barr-2細胞

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H-889細胞類似產品：：NCI-H1930細胞、NS-I/1細胞、SCL-1細胞

H4-IIE-C3細胞類似產品：：CAL 27細胞、Human Embryonic Kidney 293細胞、Walker-Ca.256細胞

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HR-8348細胞類似產品：：MV(4;11)細胞、NCI-H441細胞、PLC/PRF5細胞

TCC-SUP細胞類似產品：：NTERA-2/D1細胞、COLO824細胞、SK-RC-20細胞

MonoMac6細胞類似產品：：DMS53細胞、SUM190細胞、NCI-H810細胞

HNE-1細胞類似產品：：SP-2細胞、DMS 79細胞、NCI-SNU-119細胞

P3 NS1 Ag4/1細胞類似產品：：OLN93細胞、Panc 2.03細胞、H-740細胞

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NW38細胞類似產品：：H1648細胞、MDA MB 361細胞、NTERA2-D1細胞

P3X63Ag8.653細胞類似產品：：SW 48細胞、CMT-167細胞、Beta-TC-6細胞

SUPB15細胞類似產品：：SN12C-PM6細胞、HRPEpiC細胞、A 2058細胞

MGH-U1細胞類似產品：：OCI-AML2細胞、IM-9細胞、GM02219C細胞

SNK-6細胞類似產品：：Turbot Embryonic Cell line細胞、HepaRG細胞、HL1細胞

MHCC97細胞類似產品：：SK N SH細胞、BPH1細胞、LN299細胞

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