"AHH-1 Cells(贈送Str鑒定報告)|人外周血B淋巴細胞
細胞背景資料:B淋巴細胞;EBV轉化
細胞形態(tài):淋巴母細胞樣
傳代培養(yǎng)及其操作步驟:原代細胞培養(yǎng)成功以后,需要進行分離培養(yǎng),否則細胞會因生存空間不足或密度過大,營養(yǎng)障礙,影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株),可以進行細胞克隆,易于保存,但可能喪失一些殊的細胞和分化征。傳代細胞形成細胞株的Zui大利處在于提供了大量持久的實驗材料,便于實驗?!静僮鞑襟E】1)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液;2)向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜;3)置37℃孵箱或室溫(25℃溫度)下進行消化,2~5min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察,當發(fā)現(xiàn)胞質回縮、細胞間隙增大后,應立即中止消化;4)吸出消化液,向瓶內加入Hanks液少量,輕輕轉動培養(yǎng)瓶,把殘留消化液沖掉,然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液,終止消化;5)使用彎頭吸管,吸取瓶內培養(yǎng)液,按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔,以防用力過猛損傷細胞;6)用計數板計數后,分別接種于新的培養(yǎng)瓶中,置CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng);7)細胞培養(yǎng)換液時間應根據細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般2~3d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面,即可使用;也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液。【注意事項】1)掌握HAO細胞消化的時間,消化時間過短時,細胞不宜從瓶壁脫落,過長的消化會導致細胞脫落、損傷;2)掌握HAO消化濃度,當消化液濃度過GAO時,消化時間應縮短,過低時細胞消化時間相對延長。
細胞生長:懸浮
BRL細胞類似產品::HEK293細胞、LAD 2細胞、Hs 445細胞
WI38細胞類似產品::NCIH748細胞、WC00059細胞、CCRF/CEM-C7細胞
HEK 293-F細胞類似產品::TR 146細胞、Chang liver細胞、RPMI No. 1846細胞
T1-73細胞類似產品::PM6細胞、C12細胞、CL MC/9細胞
Buffalo Rat Liver-3A細胞類似產品::VMRCLCD細胞、Hs940.T細胞、Verda reno細胞
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題,客戶遇到的問題從細胞生長角度來說,針對細胞培養(yǎng)過程中生長不HAO、甚至死亡的原因,我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不HAO》可能原因:細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數多,細胞老化;2)細胞的接種量:接種量過低,細胞生長緩慢;3)細胞傳代時間過晚:細胞中毒,影響傳代后的細胞生長;4)胰酶消化時間過長或過短:時間過長,細胞死亡;時間過短,細胞未完全分離而成團,細胞死亡;5)細胞的凍存與復蘇:慢凍速融。污染:1)支原體污染;2)霉菌污染;培養(yǎng)基或血清:1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證;2)選擇的培養(yǎng)基是否合適;3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤;培養(yǎng)環(huán)境:1)CO2供應是否正常;2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確;解決方法:根據以上四個方面的可能原因,做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài):如傳代次數、接種量等;2)避免產生污染(用正規(guī)、合法、可溯源的血清);3)要用合適的血清或培養(yǎng)基,ZuiHAO經過驗證;4)注意實驗室的環(huán)境;二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因:1)培養(yǎng)箱內無CO2;2)培養(yǎng)箱內溫度波動太大;3)細胞凍存或復蘇過程中損傷;4)培養(yǎng)液滲透壓不正確;5)培養(yǎng)液中有毒代謝產物堆積;解決方法:1)檢測培養(yǎng)箱內CO2;2)檢查培養(yǎng)箱內溫度;3)取新的保存細胞種;4)檢測培養(yǎng)液滲透壓;5)換入新鮮培養(yǎng)液。
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
NCI-H1436細胞類似產品::LNCaP FGC細胞、V79細胞、H2087細胞
Jiyoye (P-2003)細胞類似產品::H-1299細胞、COS1細胞、HMCB細胞
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KYSE 450細胞類似產品::Med 283細胞、WM239細胞、SNU354細胞
NCIH2106細胞類似產品::GM03190細胞、RCF細胞、MN 60細胞
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:懸浮
OE33細胞類似產品::HPMC細胞、Ramos 2G6 4C10細胞、SK Hep1細胞
BHT101細胞類似產品::NBL-7細胞、MB231細胞、UMUC-3細胞
Hepatoma 22細胞類似產品::GM03190A細胞、NCI-H1563細胞、OCILY-19細胞
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NK92細胞類似產品::HSC5細胞、PC-9/S1細胞、N1S1細胞
Michigan Cancer Foundation-10A細胞類似產品::ST486細胞、VP303細胞、3T3-J2細胞
為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代?體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的性,也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候,它就會停止生長,及時傳代后,細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些?可能的原因有:更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞;培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染;試劑保存不當;比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清等,找出其它可能的原因。解決辦法:增加起始培養(yǎng)細胞濃度;讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補加谷酷肢或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,去棄培養(yǎng)物,或用抗生素除菌;血清需保存在5℃到20℃; 培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內用完;分離培養(yǎng)物,檢測支原體。冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后,須立即放入37℃水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內大部分融化,別注意,需殘留一小塊冰塊,就可拿到超凈工作臺操作細胞,用75%酒精消毒凍存管,用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管爆裂。
細胞株(系)的使用,為醫(yī)學研究和測試工作帶來了極大的方便。但細胞的傳代是有限制的,長期連續(xù)傳代的細胞,不僅消耗大量的人力和物力,而且細胞的生長與形態(tài)等會有一定退變或轉化,因而細胞失去原有的遺傳性,有時還會由于細胞污染而造成傳代中斷,種子丟失。因此,在實際工作中常需凍存一定數量的細胞,以備替換使用。細胞冷凍與復蘇是細胞培養(yǎng) 室的常規(guī)工作和通用技術。目前,細胞凍存Zui常用的技術是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護劑的緩慢冷凍法凍存細胞。細胞在不加任何保護劑的情況下直接冷凍,細胞內外的水分會很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應。如細胞脫水使局部電解質濃度增GAO,pH值改變,部分蛋白質由于上述原因而變性,引起細胞內部空間結構紊亂,溶酶體膜由此遭到損傷而釋放出溶酶體酶,使細胞內結構成分造成破壞,線粒體腫脹,功能丟失,并造成能量代謝障礙。胞膜上的類脂蛋白復合體也易破壞引起細胞膜通透性的改變,使細胞內容物丟失。如果細胞內冰晶形成較多,隨冷凍溫度的降低,冰晶體積膨脹造成細胞核DNA空間構型發(fā)生不可逆的損傷,而致細胞死亡。因此,細胞冷凍技術的關鍵是盡可能地減少細胞內水分,減少細胞內冰晶的形成。采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質分子量小,溶解度大,易穿透細胞,可以使冰點下降,提GAO細胞膜對水的通透性,且對細胞無明顯毒性。慢速冷凍方法又可使細胞內的水分滲出細胞外,減少胞內形成冰結晶的機會,從而減少冰晶對細胞的損傷。
IEC-6細胞類似產品::AdHek細胞、OCI-LY-7細胞、Hs 839.T細胞
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HEL 299細胞類似產品::H2085細胞、MM.1S細胞、L-5178-Y細胞
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H9c2 (2-1)細胞類似產品::HT clone H9細胞、SKRC-52細胞、LIPF155C細胞
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C-33-A細胞類似產品::PVEC細胞、293c18細胞、NCI-H2107細胞
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SCC-4細胞類似產品::NCIH1048細胞、TE7細胞、SUM-149PT細胞
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SMA-560細胞類似產品::MD Anderson-Metastatic Breast-361細胞、801-D細胞、Tu-686細胞
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SCC15細胞類似產品::H1092細胞、NCI-H1694細胞、Colo699細胞
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NGEC細胞類似產品::Duke University 145細胞、TCam-2細胞、SF-763細胞
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CNE1細胞類似產品::OE33細胞、KMS-11細胞、HEK-293細胞
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L 363細胞類似產品::WEHI 3B細胞、MDCK.2細胞、LU451細胞
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H358細胞類似產品::P3/NS1/1-Ag4.1細胞、NK-92 transfected with MFG-hIL2細胞、ACC-2細胞
NCIH747細胞類似產品::SK Mel 1細胞、RFL-6細胞、U266BL細胞
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D-283 Med細胞類似產品::KALS1細胞、HCC1954 BL細胞、RA-FLSs細胞
KHYG細胞類似產品::Cates 1B細胞、OVCAR8/ADR細胞、H2172細胞
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Colo741細胞類似產品::KYSE-410細胞、EnCa1細胞、TE671細胞
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NSC34細胞類似產品::NTera 2/cl.D1細胞、H.Ep. #2細胞、LC1-Sq細胞
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HCT.116細胞類似產品::SO-Rb 50細胞、P3-X63-Ag8-653細胞、SHSY-5Y細胞
Adeno-293細胞類似產品::VMRC-LCD細胞、TSCC1細胞、8402細胞
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Hep G2細胞類似產品::SKLU1細胞、NCI-H187細胞、C8166-CD4細胞
HeLa-S3細胞類似產品::Hamster Islet Transformed-Tioguanine resistant clone 15細胞、P3-X63-Ag8細胞、SW 579細胞
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293T/17細胞類似產品::SU-DHL-16細胞、IPEC1細胞、H1693細胞
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Jeko1細胞類似產品::Mel-RM細胞、MMVECs細胞、ChaGo-K1細胞
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4T1.2細胞類似產品::SHG-44細胞、143 B細胞、Colon26細胞
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CAL 12細胞類似產品::PTK2細胞、HO8910/PM細胞、IPLB-SF 21細胞
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C-Lu65細胞類似產品::MOLP-2細胞、RCC10細胞、NCIH2009細胞
Roswell Park Memorial Institute 7951細胞類似產品::NCI-ADR-RES細胞、SKN-AS細胞、A-375.S2細胞
L-540細胞類似產品::FRO 81-2細胞、NCI-H2405細胞、RL-95-2細胞
BSC-1細胞類似產品::COV 504細胞、Tn5B1-4細胞、RBMVEC細胞
769-P細胞類似產品::143B細胞、MA 104細胞、RBE細胞
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上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。