"FAK+/+ Cells(贈送Str鑒定報告)|小鼠成纖維細胞

細胞背景資料：詳見相關文獻介紹

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代培養(yǎng)及其操作步驟：原代細胞培養(yǎng)成功以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養(yǎng)障礙，影響細胞生長。細胞由原培養(yǎng)瓶內分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的過程稱之為傳代培養(yǎng)。傳代細胞允許培養(yǎng)的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些殊的細胞和分化征。傳代細胞形成細胞株的Zui大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗?！静僮鞑襟E】１)吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內舊培養(yǎng)液；２)向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養(yǎng)瓶底為宜；３)置３７℃孵箱或室溫(２５℃溫度)下進行消化，２~５min后把培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)胞質回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養(yǎng)瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養(yǎng)液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養(yǎng)液，終止消化；５)使用彎頭吸管，吸取瓶內培養(yǎng)液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞；６)用計數(shù)板計數(shù)后，分別接種于新的培養(yǎng)瓶中，置CO２培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)；７)細胞培養(yǎng)換液時間應根據(jù)細胞生長的狀態(tài)和實驗要求來確定。一般２～３d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續(xù)傳代擴大培養(yǎng)或換成維持液?！咀⒁馐马棥浚?掌握HAO細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷；２)掌握HAO消化濃度，當消化液濃度過GAO時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。

細胞生長：貼壁

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細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

懸浮細胞不容易轉染：懸浮細胞是指細胞生長不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長，如淋巴細胞。在實驗室經常會遇到懸浮細胞的轉染，其和貼壁細胞轉染還是有很大不同的。目前大多數(shù)實驗室用的是脂質體類的轉染試劑，脂質體轉染是基于電荷吸引原理，先形成脂質體-DNA復合物，散布在細胞周圍，然后通過細胞的內吞作用，將目的基因導入細胞內，而脂質體復合物與貼壁細胞的接觸機會比懸浮細胞GAO出很多倍，所以，脂質體轉染時懸浮細胞的轉染效率要明顯低于貼壁細胞。其次，脂質體試劑的毒性較大，這就使得懸浮細胞的轉染更為困難了。另外，懸浮細胞不易培養(yǎng)，易死亡，也給細胞轉染造成了一定的困難。為了提GAO懸浮細胞的轉染效率，可以使用非脂質體的轉染試劑，如納米材料的。也可以使用電轉染方法，針對懸浮細胞等難轉染細胞還是挺不錯的，電擊對細胞有一定的損傷，ZuiHAO選用具有細胞膜修復功能的電轉染試劑，可以將電擊對細胞的傷害降到Zui低，懸浮細胞不易轉染，選對試劑及良HAO的細胞培養(yǎng)環(huán)境才是關鍵。

細胞傳代方法：１：４-１：８傳代； 

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細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁生長

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細胞接收后的操作流程與注意事項：１)如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加１５%血清的完全培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)３天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為１５%血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)３天。３天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請及時聯(lián)系實驗室技術人員會跟進解決；２)貼壁細胞生長緩慢；適當提GAO血清濃度(ZuiGAO不能超過２０%)，或可根據(jù)該細胞生長密度，考慮胰酶消化后，轉移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)；３)生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

正確的細胞復蘇需知事項：細胞凍存HAO了，接下來要注意什么問題呢？沒錯，就是記得到時間了，拿出來復蘇。那么，細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢？細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在？活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞，可能有污染(真菌、支原體等)，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞：補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至７０%單層時收獲細胞，計數(shù)活細胞數(shù)，用凍存液調整細胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調整)；凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細胞類型選擇Zui合適的凍存液(常用的凍存液成分有)：５-１０% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質；５-１５%甘油；如果細胞在無血清培養(yǎng)基內生長，應在５０%條件培養(yǎng)基內(細胞在無血清培養(yǎng)基內生長２４小時)內凍存和復蘇。在凍存管上標記HAO細胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過１.５ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以Zui快的速度轉移凍存管知液氮罐內，因此，此步驟ZuiHAO使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息，做HAO記錄是非常非常重要的！還有一個Zui重要的，一定要在異地的液氮罐內保存同樣的一份細胞，以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題！細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，熟記以下要點：當從液氮罐內取出細胞時，有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況，使用保護面罩和防護服十分必要；其實，細胞復蘇只是一個簡單的實驗，不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié)，不然，也不一定會盡如人意。例如說，人身健康方面：一定要記得做HAO防凍工作，戴上護目鏡；盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。

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