"LTEP-a2 Cells(贈送Str鑒定報告)|人肺腺癌細胞
細胞背景資料:肺腺癌;女性
細胞形態(tài):上皮細胞樣
【細胞培養(yǎng)中原蟲的污染情況總結】原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態(tài)不HAO,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站YOU勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,Zui終形成惡性循環(huán)。污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關于培養(yǎng)基的無菌狀況,取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細胞),37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(酸鏈霉素和芐青霉素)。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài),所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結果。1)孵箱應定期用三氧機消毒或者紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水;2)超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素;3)超凈臺的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染;4)無菌室經甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的噴灑中和,約幾小時即可進入操作。
細胞生長:貼壁
293H細胞類似產品::SMC-1細胞、HEK (AD293)細胞、MSB-1細胞
H-1792細胞類似產品::Detroit 562細胞、NTERA-2 clone D1細胞、HuPT3細胞
PK15細胞類似產品::WM 2664細胞、HEC151細胞、Mel RM細胞
SkChA1細胞類似產品::REC1細胞、H-146細胞、LU165細胞
HCC9724細胞類似產品::BIU87細胞、MRAEC細胞、T-47D細胞
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細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
[細胞產品包裝]鮮活細胞:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞:1ml凍存管(兩支)
細胞培養(yǎng)更HAO經驗詳解:1)收到細胞,首先要鏡檢:觀察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很HAO,觀察細胞密度,有疑議及時咨提供細胞的技術人員。 由于運輸的時間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣,主要是貼壁牢固問題。比如293T,平時貼壁就不是很牢,在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面,會發(fā)生大片的脫落,細胞聚集在一起,但是細胞生長還是正常的,通過離心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的貼壁生長。2)當通過上一步的觀察,細胞初步沒有問題時,進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時,則處理如下:棄除瓶中大部分培養(yǎng)基,僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基;或更換新鮮的培養(yǎng)基,置于培養(yǎng)箱中,隨后每天觀察。 細胞在低于正常生長溫度情況下,會調整為靜止期,或者慢速生長期,恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右,才能重新調整到接近對數生長期的狀態(tài),在對數生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率,和細胞的存活率。3)如果經步觀察發(fā)現細胞密度超過90%,并且細胞狀態(tài)很HAO時,則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快,狀態(tài)穩(wěn)定,不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶;對于生長較慢,細胞比較薄,狀態(tài)容易波動的細胞類型,一次少傳些,每瓶細胞密度大些,便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞,次處理也可以依照第二種情況。
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
VeroC1008細胞類似產品::Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B細胞、CEMO-1細胞、EST81細胞
7860細胞類似產品::HPAF II細胞、IMR90細胞、RS411細胞
Psi2 DAP細胞類似產品::NCIH128細胞、A9(Hamprecht)細胞、ML2細胞
ZR751細胞類似產品::PK (15)細胞、DI TNC1細胞、CHP-212細胞
HCC0044細胞類似產品::C-4 I細胞、Hs 852.T細胞、VERO76細胞
細胞來源說明:來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫
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細胞生長特性:貼壁
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細胞培養(yǎng)實驗中常見問題總結:1)一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?客戶收到細胞后先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。細胞消化液建議使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快遞細胞多久能到,是寄凍存的細胞還是復蘇HAO的細胞?我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,寄細胞前請確認當地溫度,如果氣溫低于4度的,則采用郵寄凍存細胞;3)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活;4)可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
貼壁細胞消化傳代時通常采用兩種方法:一、加入胰酶等細胞脫落后,再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,離心傳代;二、加入胰酶后,鏡下觀察待細胞始脫落時,棄胰酶,加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩,而后者有可能對細胞施加胰酶選擇,因為總是貼壁不牢的細胞先脫落,對腫瘤細胞來說,這部分細胞有可能是惡性程度較GAO的細胞亞群。一種簡單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據細胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將細胞消化單細胞。對于較難消化的細胞,可以用2%利多卡因消化5-8分鐘,然后再棄去,加培養(yǎng)基吹打也可以,對細胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗,只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點,直接加酶消化應該不會有什么問題。棄培養(yǎng)液后,用0.04%的EDTA沖洗一次,再用1/4v的0.04%的EDTA室溫孵育5min,棄取大部分EDTA,加入與剩余EDTA等量的胰酶(預熱)總體積1/10v。消化到有細胞脫落。不過有人說EDTA對細胞不HAO,有證據嗎?培養(yǎng)的BASMC:倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下,倒掉再加入0.125-0.25%胰酶約6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和,并分瓶這種方法簡單、省事;效果很HAO并且不損失細胞!
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上海冠導生物工程有限公司,先后從ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、PromoCell、ScienCell、JCRB等國內外細胞庫引進細胞2000余株。以此為契機,公司組建了冠導細胞庫,我司細胞均由資深細胞培養(yǎng)工程師進行培養(yǎng)。我司可以提供的細胞有:①細胞系②原代細胞③穩(wěn)轉株④耐藥株⑤標記細胞⑥細胞配套試劑等。