"HHUA Cells(贈送Str鑒定報告)|人子宮內膜癌細胞

細胞背景資料：子宮內膜癌；女性

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

解凍細胞常見實驗問題分析及推薦解決方法：在解凍凍存細胞時，發(fā)現(xiàn)會出現(xiàn)存活率低、大量細胞碎片及生長緩慢等問題，究竟是什么原因導致，我們該怎么進行解決？以下是國內外細胞培養(yǎng)專家針對解凍細胞實驗問題，總結的一些解決方案！出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：１)解凍過程中細胞裂解，推薦的解決方案：可預期到一定量的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠GAO，考慮到這一損失。起始濃度為１*１０(６)至１*１０(７)細胞/毫升；２)解凍過程中的問題，推薦的解決方案：在-７０℃至-８０℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時間為１-５天，但這不是保存的方法。在３７℃充分解凍后應立即開始培養(yǎng)；３)對冷凍液過敏，推薦的解決方案：A.完全或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在２４小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復。有時細胞需要幾周時間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時細胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長階段中的位置。冷凍的Zui佳條件在對數(shù)期；４)被冷凍的原種細胞的年齡或冷凍時培養(yǎng)物的年齡，推薦的解決方案：解凍Zui近冷凍的細胞。細胞處于冷凍狀態(tài)的時間越長，存活率越低。檢查冷凍細胞的時間和方法。在冷凍時細胞應處于對數(shù)期。

細胞生長：貼壁

MESSA細胞類似產品：：M109細胞、KYSE-70細胞、L1210細胞

RBL細胞類似產品：：MMAc.SF細胞、NK92MI細胞、H747細胞

Centre Antoine Lacassagne-78細胞類似產品：：H-548細胞、LNT-229細胞、NTERA2-cloneD1細胞

MDAMB468細胞類似產品：：HT1080細胞、BC-023細胞、IM9細胞

TE-5細胞類似產品：：Leydig細胞、KU1919細胞、T.T細胞

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細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

在細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養(yǎng)過程中生長不HAO、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不HAO》可能原因：細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數(shù)多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養(yǎng)基或血清：1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；2)選擇的培養(yǎng)基是否合適；3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤；培養(yǎng)環(huán)境：1)CO2供應是否正常；2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等；2)避免產生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養(yǎng)基，ZuiHAO經過驗證；4)注意實驗室的環(huán)境；二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因：1)培養(yǎng)箱內無CO2；2)培養(yǎng)箱內溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養(yǎng)液滲透壓不正確；5)培養(yǎng)液中有毒代謝產物堆積；解決方法：1)檢測培養(yǎng)箱內CO2；2)檢查培養(yǎng)箱內溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養(yǎng)液滲透壓；5)換入新鮮培養(yǎng)液。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

LYR細胞類似產品：：SU-DHL6細胞、XuanWei Lung Cancer-05細胞、HSC6細胞

KY70細胞類似產品：：MC3T3-E1 Subclone 4細胞、SNU398細胞、Malme-3M細胞

MC-CAR細胞類似產品：：NSH細胞、SKLU1細胞、BE2M17細胞

IOSE-Mar細胞類似產品：：4T1-A細胞、GM02132細胞、SEG1細胞

SMA560細胞類似產品：：Kit 225 K6細胞、CEM/0細胞、PECAPJ34細胞

細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

Sp2/0-Ag-14細胞類似產品：：H1404細胞、SW 1463細胞、MCAEC細胞

EB-2細胞類似產品：：Rainbow Trout Embryo細胞、U251n細胞、CHO-S細胞

MC38細胞類似產品：：QG56細胞、H-1238細胞、OCM1A細胞

HCC94細胞類似產品：：HCC-2218細胞、AN-3細胞、H2227細胞

Hs888 Lu細胞類似產品：：NE-4C細胞、NTERA-2 cl.D1細胞、Ca9-22細胞

JurkatE6-1細胞類似產品：：Walker-256-TC細胞、NR8383.1細胞、28SC細胞

細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請嚴格遵照無菌操作)：１)吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加２-３ml ０.２５%胰酶進行消化細胞(注意把握消化時間，通常控制在１-２min)；２)鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰酶，加６-８ml完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散；３)取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；４)注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液(每周２-３次)，待細胞密度達到８０%以后重復１項操作或者凍存；別注意：(如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng))１)收到細胞后請盡快更換為含１５%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因殊情況需要繼續(xù)使用原瓶，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加１０%的血清，(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間Zui長不宜超過７２小時)；２)貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育到第二天再做消化傳代，請YOU先選擇直徑６cm的培養(yǎng)皿進行傳代培養(yǎng)；３)如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做HAO照片記錄并聯(lián)系實驗室。

細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結構，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更HAO。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣GAO壓消毒)，２mL安瓿(或專用細胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天ZuiHAO換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或專用冷凍塑料管中，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記HAO細胞名稱和凍存日期，同時作HAO登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝HAO細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內;置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，Zui后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，ZuiHAO取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。

AE1201細胞類似產品：：COLO 357細胞、WM-266-mel細胞、MM1S細胞

CNE-1細胞類似產品：：HPBALL細胞、SUSM1細胞、IA-LM細胞

CMT167細胞類似產品：：NS1/1-Ag4.1細胞、LIM-1215細胞、MC/CAR細胞

FHL124細胞類似產品：：GCT0404細胞、MADISON LUNG TA-109細胞、HeLa-229細胞

SUSM-1細胞類似產品：：NCIH2073細胞、Hs604T細胞、MKN45細胞

JB6Cl30細胞類似產品：：MLO-Y4細胞、H661細胞、DHL4細胞

CT-26 WT細胞類似產品：：Line 697細胞、CAL33細胞、Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細胞

P3.653細胞類似產品：：Ect1/E6E7細胞、Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-2細胞、H446細胞

WM239細胞類似產品：：GM03320D細胞、SNU-423細胞、TU 686細胞

RPMI 6666細胞類似產品：：TOV-112細胞、Fetal Human Colon細胞、NCI-H1437細胞

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M1細胞類似產品：：VM-CUB-1細胞、COLO-320細胞、MDA-MB-435S細胞

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MDA-MB 361細胞類似產品：：Roswell Park Memorial Institute 6666細胞、HUASMC細胞、SF-126細胞

KYSE 150 KYSE150 Kyse150 KY150

細胞類似產品：：NCIH1299細胞、SUP-B15細胞、C6細胞

CHL/IU細胞類似產品：：NCI-747細胞、DoTc2細胞、MOLP8細胞

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EFO 27細胞類似產品：：TU 686細胞、Kit-225細胞、JB6 [Mouse]細胞

CFPAC-1細胞類似產品：：TMK1細胞、ACT-1細胞、JeKo-1細胞

NFHIOSE-29細胞類似產品：：NCM356細胞、NCI-H2029細胞、NCIH1341細胞

SU-DHL-10細胞類似產品：：BC-020細胞、Rat-2細胞、NCIH2170細胞

Hepa-RG細胞類似產品：：SF 763細胞、DHL4細胞、NCIH1373細胞

SK RC 52細胞類似產品：：RCC-10細胞、NCI-BL2141細胞、H-322細胞

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HTh74細胞類似產品：：NCI-H1568細胞、KG1A細胞、KY-50細胞

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BE2-M17細胞類似產品：：COLO680N細胞、CDC/EU.HMEC-1細胞、SW1222細胞

HGSMC細胞類似產品：：TE12細胞、RC92A細胞、NCI H82細胞

KU-812細胞類似產品：：PC14細胞、2008細胞、NKT細胞

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WB F344細胞類似產品：：T-HSC細胞、LS-174T細胞、RPMI8226/S細胞

SRA01/04 (HLE)細胞類似產品：：AMO-1細胞、SBC3細胞、3-LL細胞

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3T3J2細胞類似產品：：UMRC2細胞、CAL-39細胞、HEK-293-FT細胞

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L- cell細胞類似產品：：UMR 106細胞、32D CL3細胞、SK MEL-28細胞

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RPMI 1846細胞類似產品：：AMC-HN8細胞、CMT64細胞、TE85細胞

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Clone 166細胞類似產品：：CCD-33Co細胞、COLO 320F細胞、SV40 MES 13細胞

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KMH2細胞類似產品：：SKNBE(2)細胞、ARIP細胞、PG-4 (S+L-)細胞

MARC145細胞類似產品：：FRH-0201細胞、IPLB-SF-21-AE細胞、HCC2157細胞

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UMNSAH/DF#1細胞類似產品：：SUM 149細胞、HELF細胞、IEC-18細胞

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COV434細胞類似產品：：SRS-82細胞、NWA細胞、FL83B細胞

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Colo699細胞類似產品：：H-2330細胞、H-661細胞、HCT116/L細胞

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