"CCD-841CoTr Cells(贈送Str鑒定報告)|人結腸癌細胞

細胞背景資料：結腸癌；SV４０轉化；女性

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

養(yǎng)了幾年細胞，說一點自己培養(yǎng)細胞方面的看法：１)培養(yǎng)細胞前，可以看看細胞點說明書，包括細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等；２)不同細胞生長周期不同，有的生長很快，比如說MDA-MB-２３１，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了，有的又是別慢，等的人心焦，BT４７４就是，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿，所以就要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索了；３)對于嬌弱的細胞，就得細心呵護了，胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間，每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況；４)凍存細胞復蘇后第二天ZuiHAO更換一次培養(yǎng)基；５)培養(yǎng)箱隔一段時間徹底用酒精棉擦洗一次；６)養(yǎng)細胞Zui大的教訓：不能偷懶!細胞虐我千百遍，我待細胞如初戀。１)不管買的細胞、惠贈的細胞，剛拿到手趕緊做兩件事：檢測是否有支原體污染; 迅速擴增凍存；２)發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉，別是當你養(yǎng)了很多種細胞時; 細菌污染，真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細胞會長的慢，買個支原體檢測的kit定期檢測一下；３)傳代細胞日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸；４)細胞的傳代一定要規(guī)律，保持相同的confluency和傳代時間間隔，不要隨心所欲或者拖延；５)注意個人衛(wèi)生。

細胞生長：貼壁

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CCD-841CoTr Cells(贈送Str鑒定報告)|人結腸癌細胞

細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

預防細胞污染的注意事項：實驗進行前，超凈臺用紫外燈照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超凈臺臺面，并開啟超凈臺風扇運轉10min左右再開始實驗操作。實驗用品用75%酒精擦拭后才能放入超凈臺內；實驗用品用完應移出超凈臺，以利于氣流的流通。實驗完成后用75%酒精擦拭超凈臺臺面。每次操作只處理一種細胞；即使不同細胞使用相同的培養(yǎng)基也不要共享同一瓶培養(yǎng)基，避免細胞間的交叉污染。操作時小心取用無菌的物品，避免污染。勿碰觸吸管尖頭，不小心碰觸后應立即更換；不要在打開的容器瓶口正上方操作，容器打開后，傾斜45°操作，操作完成后及時蓋上瓶蓋。CO2培養(yǎng)箱的清潔是較易被忽視的地方，應1-2個月對培養(yǎng)箱定期進行清潔消毒。先用75%酒精擦拭培養(yǎng)箱內壁、隔板、水盤2-3次，用雙蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，后紫外燈照射4h以上。水盤內加入無菌水（應每周更換），待培養(yǎng)箱內溫度、濕度、CO2濃度穩(wěn)定后再放入細胞。定期清洗或更換超凈臺過濾膜、預濾網(wǎng)。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

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CCD-1112sk細胞類似產品：：Renal Carcinoma細胞、Vertebral Cancer of the Prostate細胞、H727細胞

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細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

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為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代？體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷酷肢或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體。冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內大部分融化，別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。

貼壁細胞消化傳代時通常采用兩種方法：一、加入胰酶等細胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；二、加入胰酶后，鏡下觀察待細胞始脫落時，棄胰酶，加培養(yǎng)液分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對細胞施加胰酶選擇，因為總是貼壁不牢的細胞先脫落，對腫瘤細胞來說，這部分細胞有可能是惡性程度較GAO的細胞亞群。一種簡單的消化傳代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(３０s)，棄之，再加入適量胰酶作用１０s-４０s(根據(jù)細胞消化的難易程度)，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將細胞消化單細胞。對于較難消化的細胞，可以用２%利多卡因消化５-８分鐘，然后再棄去，加培養(yǎng)基吹打也可以，對細胞的影響不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把舊培養(yǎng)液吸的干凈一點，直接加酶消化應該不會有什么問題。棄培養(yǎng)液后，用０.０４%的EDTA沖洗一次，再用１/４v的０.０４%的EDTA室溫孵育５min，棄取大部分EDTA，加入與剩余EDTA等量的胰酶(預熱)總體積１/１０v。消化到有細胞脫落。不過有人說EDTA對細胞不HAO，有證據(jù)嗎？培養(yǎng)的BASMC：倒掉舊培養(yǎng)液加入少量胰酶沖一下，倒掉再加入０.１２５-０.２５%胰酶約６-１０滴或１ml(２５ml bottle)消化再加入適量新培養(yǎng)基中和，并分瓶這種方法簡單、省事；效果很HAO并且不損失細胞！

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