"ETCC007 Cells(贈送Str鑒定報告)|人乳腺導管癌細胞

細胞背景資料：原位導管癌；女性

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

解凍細胞出現大量細胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：１)冷凍時細胞密度過低：推薦的解決方案：縮短解凍過程中的時間。將細胞取出后，立即將凍存管浸入在３７℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉移到預熱的培養(yǎng)基中；２)不適當的冷凍過程：推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當的技術，并確保使用了適量和適合的冷凍液。出現生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：１)培養(yǎng)瓶的大?。阂话憬鉀Q方案是一些細胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉移到較小的培養(yǎng)瓶中，使細胞密度上升；如，根據培養(yǎng)基的體積，從T７５培養(yǎng)瓶轉移到２或３個T２５培養(yǎng)瓶中；２)細胞密度過低：通常解決方案是提GAO未來冷凍物種細胞的凍存密度，或使用較小的培養(yǎng)容器，或解凍多個試管來進行培養(yǎng)。

細胞生長：貼壁

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細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源

[細胞產品包裝]鮮活細胞：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存細胞：１ml凍存管(兩支)

細胞培養(yǎng)更HAO經驗詳解：1)收到細胞，首先要鏡檢：觀察細胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很HAO，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術人員。 由于運輸的時間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。2)當通過上一步的觀察，細胞初步沒有問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。 細胞在低于正常生長溫度情況下，會調整為靜止期，或者慢速生長期，恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調整到接近對數生長期的狀態(tài)，在對數生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。3)如果經步觀察發(fā)現細胞密度超過90%，并且細胞狀態(tài)很HAO時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細胞類型，一次少傳些，每瓶細胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞，次處理也可以依照第二種情況。

細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。

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H748細胞類似產品：：MJ細胞、H-2009細胞、CAL 27細胞

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細胞來源說明：來源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名細胞庫

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細胞生長特性：貼壁

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如何進行細胞復蘇：１)從液氮容器中取出凍存管，直接浸入３７℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化；２)從３７℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加１０倍以上培養(yǎng)液，混勻；３)離心，１０００rpm，５min；４)棄去上清液，加入含１０%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞，計數，調整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，３７℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；５)次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。【溫馨提醒】１)從增殖期到形成致密的單層細胞以前的培養(yǎng)細胞都可以用于凍存，但ZuiHAO為對數生長期細胞。在凍存前一天ZuiHAO換一次培養(yǎng)液；２)將凍存管放入液氮容器或從中取出時，要做HAO防護工作(戴棉手套)，以免凍傷；３)凍存和復蘇ZuiHAO用新配制的培養(yǎng)液。細胞復蘇的時候，有些初次實驗員將凍存管從液氮中取出后，放在室溫下，經常發(fā)生凍存管爆炸，該怎么避免出現這種情況嗎？其中在擰緊凍存管的時候是否有哪些細節(jié)要注意的？一般常用的方法是取出凍存管后在超凈工作臺中用酒精棉球擦試管口，再稍擰松蓋子，再放３７度水浴鍋中搖溶，在將細胞轉移到裝有３７度預熱過的培養(yǎng)基的試管中，迅速離心，再用培養(yǎng)基洗一遍。

細胞復蘇相關注意事項：１.取細胞的過程中注意帶HAO防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)ZuiHAO選擇進口產品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較GAO，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不HAO離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰HAO稀釋到了無害濃度。

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