Pemetrexed Disodium Hydrate

別名: LY-231514 Disodium Hydrate 中文名稱：培美曲塞二鈉水合物

目錄號(hào)：S7785 Purity: 99.99%

Pemetrexed Disodium Hydrate (LY-231514) 培美曲塞是一種新型抗葉酸劑和抗代謝物質(zhì)，作用于TS，DHFR 和 GARFT，K_i分別為1.3 nM，7.2 nM 和 65 nM。Pemetrexed Disodium Hydrate 可刺激細(xì)胞自噬和凋亡。

Pemetrexed Disodium Hydrate Chemical Structure

CAS: 357166-30-4

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生物活性

產(chǎn)品描述

靶點(diǎn)

TS ^[1]	DHFR ^[1]	GARFT ^[1]
1.3 nM(Ki)	7.2 nM(Ki)	65 nM(Ki)

體外研究(In Vitro)
體外研究活性	Pemetrexed disodium在CCRF-CEM 白血病，GC3/C1結(jié)腸癌，和HCT-8回盲部結(jié)腸癌細(xì)胞中表現(xiàn)出抗腫瘤活性，IC50 分別為25 nM，34 nM 和 220 nM。^[1]一項(xiàng)最近的研究表明cisplatin和Pemetrexed結(jié)合SOCS-1基因轉(zhuǎn)移，通過抑制細(xì)胞增殖和侵襲，以及誘導(dǎo)感染腺病毒表達(dá)SOCS-1載體的MPM細(xì)胞凋亡，表現(xiàn)出抗腫瘤作用。^[2]
激酶實(shí)驗(yàn)	酶測(cè)定和方法
激酶實(shí)驗(yàn)	TS活性使用分光光度法測(cè)定，監(jiān)測(cè)由于產(chǎn)物7,8-dihydrofolate的形成，導(dǎo)致的340 nm處吸光度增加。實(shí)驗(yàn)緩沖液包含50 mM N-tris[羥甲基]甲基-2-氨基乙磺酸，25 mM MgC1₂，6.5 mM甲醛，1 mM EDTA，和75 mM 2-巰基乙醇，pH 7.4。脫氧鳥苷酸單磷酸鹽，6R-MTHF，和hIS的濃度分別為100 μM，30μM 和 30 nM (1.7 milliunits/mL)。在6R-MTHF濃度下，測(cè)定未抑制的反應(yīng)和6個(gè)濃度的抑制劑。K_{i app}值使用ENZFITTER程序通過非線性回歸分析將數(shù)據(jù)擬合到Morrison方程測(cè)定。K_i值使用如下方程式計(jì)算：K_{i app}= K_i(1 + [S]/K_m)，其中[S] 等于30 μM，K_m 等于 3 μM。DHFR活性通過分光光度法在340 nm下監(jiān)測(cè)底物NADPH和7,8-二氫葉酸的消失測(cè)定。反應(yīng)于25°C下在0.5 mL 50 mM磷酸鉀緩沖液中進(jìn)行，緩沖液包含150 mM KC1 和 10 nM 2-巰基乙醇，pH 7.5，和14 nM (0.34 milliunitlmL) DHFR。NADPH濃度為10 μM，而7,8-二氫葉酸的濃度在5，10，或15 μM間變化。在每個(gè)7,8-二氫葉酸的濃度下，未抑制的反應(yīng)和7個(gè)抑制劑濃度被測(cè)定。使用ENZFITI'ER微機(jī)程序通過非線性回歸分析將數(shù)據(jù)擬合到Morrison方程以得到K_{i app}值。K_{i app}= K_i(1 + [S]/K_m)，其中[S] 等于使用的7,8-二氫葉酸的濃度，而7,8-二氫葉酸的K_m等于0.15 μM。GARFT活性通過分光光度法在295 nm下監(jiān)測(cè)產(chǎn)物5,8-dideazafolate形成導(dǎo)致吸光度的增加進(jìn)行測(cè)定。反應(yīng)溶劑包含75 mM HEPES，20% 甘油，和50 mM a-thioglygerol，pH 7.5，溫度為25°C。底物和酶的濃度為10 μM α,β-甘氨酰胺核苷酸，0-10 μM 10-formyl-5,8-dideazafolic acid，和10 nM (1.9 milliunits/mL) GARFT。K_i值使用Beckman DU640分光光度計(jì)的酶作用機(jī)理程序計(jì)算，其使用非線性回歸分析將數(shù)據(jù)擬合到競(jìng)爭(zhēng)性抑制的Michaelis-Menten方程。
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)	細(xì)胞系	CCRF-CEM 白血病，GC3/C1 結(jié)腸癌，和 HCT-8 回盲腸腫瘤細(xì)胞
	濃度	0-30 μM
	孵育時(shí)間	72小時(shí)
	方法	生成劑量反應(yīng)曲線以確定50%生長(zhǎng)抑制(IC50)的濃度。Pemetrexed disodium首先以4 mg/mL的濃度溶解于DMSO，進(jìn)一步用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋到所需濃度。完全培養(yǎng)基中的CRF-CEM白血病細(xì)胞加入到總體積為2.0 mL的24-孔 Cluster板。將不同濃度的Pemetrexed disodium加入到孔中，并重復(fù)兩份，使DMSO的終濃度為0.5%。板在37 °C，5% CO₂的空氣中培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，細(xì)胞數(shù)量在ZBI Coulter計(jì)數(shù)器上測(cè)定。對(duì)于幾個(gè)研究，每個(gè)化合物的IC50s在300 μM AICA，5 μM 胸腺嘧啶，100 μM 次黃嘌呤，或5 μM胸腺嘧啶結(jié)合100 μM 次黃嘌呤存在下測(cè)定。對(duì)于粘附的腫瘤細(xì)胞，修正的原始MTT比色測(cè)定用于測(cè)量細(xì)胞毒性。人腫瘤細(xì)胞接種在100 μL試驗(yàn)培養(yǎng)基/孔的96孔平底組織培養(yǎng)板。試驗(yàn)培養(yǎng)基包含不含葉酸的RPMI 1640，用10% FCS和作為唯一葉酸來源的2 nM 亞葉酸或2.3 μM 葉酸進(jìn)行補(bǔ)充?？?A作為空白對(duì)照。葉酸拮抗物的儲(chǔ)備溶液在Dulbecco's PBS中以1 mg/mL制備，隨后一系列2倍稀釋物在PBS中制備。每個(gè)濃度的10μL等分試樣加入到孔中，并重復(fù)三份。板在37 °C，潮濕的5% CO₂空氣中培養(yǎng)72小時(shí)。MTT以5 mg/mL溶解在PBS中，10 μL儲(chǔ)備MTF溶液加入到每個(gè)測(cè)試孔中，將板在37 °C下再培養(yǎng)2個(gè)小時(shí)。接下來的培養(yǎng)，將100 μL DMSO加入到每孔中。甲瓚完全溶解后，板在Dynatech MR600閱讀器上讀取數(shù)據(jù)，測(cè)試波長(zhǎng)為570 nm，參考波長(zhǎng)為630 nm。與對(duì)照組相比，抑制50%細(xì)胞生長(zhǎng)所需的藥物濃度為IC50。
實(shí)驗(yàn)圖片	檢測(cè)方法	檢測(cè)指標(biāo)	實(shí)驗(yàn)圖片	PMID
	Western blot	p-Chk1 / Chk1 / Cyclin D / Cyclin E / p-Histone H3 / Histone H3 / Cyclin B1 / p-Cdc2 / Cdc2 Topo IIα / Topo I / γH2AX / Cleaved PARP / Survivin AKT / p-AKT / GSK3β / p-GSK3β EGFR / p-EGFR		22237209
	Growth inhibition assay	Cell viability		28719077
	Immunofluorescence	p-AKT		24847863

體內(nèi)研究(In Vivo)
體內(nèi)研究活性	在人H460非小細(xì)胞肺癌異種移植物中，Pemetrexed disodium產(chǎn)生持續(xù)依賴性腫瘤生長(zhǎng)延遲(TGD)。^[3]
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)	Animal Models	EMT-6 乳腺癌，人 HCT 116 結(jié)腸癌，和人 H460 非小細(xì)胞肺癌皮下注射到裸鼠體內(nèi)。
	Dosages	100 mg/kg 或 150 mg/kg
	Administration	i.p.給藥

NCT Number	Recruitment	Conditions	Sponsor/Collaborators	Start Date	Phases
臨床試驗(yàn)信息 (data from https://clinicaltrials.gov, updated on 2024-05-22)
NCT06378892	Recruiting	Non Small Cell Lung Cancer Metastatic\|ALK Gene Mutation	Centro di Riferimento Oncologico - Aviano	March 15 2024	Phase 2
NCT06010277	Recruiting	NSCLC\|Mesothelioma\|Thymoma	Amphia Hospital\|Albert Schweitzer Hospital	February 6 2023	Phase 4

參考文獻(xiàn)
[1] Shih C, et al. Cancer Res. 1997, 57(6), 1116-1123. [2] Iwahori K, et al. Int J Cancer. 2012, doi: 10.1002/ijc.27611. [3] Teicher BA, et al. Clin Cancer Res. 2000, 6(3), 1016-1023.

參考文獻(xiàn)

[1] Shih C, et al. Cancer Res. 1997, 57(6), 1116-1123.
[2] Iwahori K, et al. Int J Cancer. 2012, doi: 10.1002/ijc.27611.
[3] Teicher BA, et al. Clin Cancer Res. 2000, 6(3), 1016-1023.