體外研究活性 |
Z-DEVD-FMK (1–200 μM)以濃度依賴的方式抑制D4-GDI裂解和細(xì)胞凋亡。[1] Z-DEVD-FMK降低神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞死亡,并顯著抑制caspase 3的活化。[3] Z-DEVD-FMK (100μM)減弱培養(yǎng)的腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中OxyHb誘導(dǎo)的細(xì)胞脫落,降低caspase-2和-3的活性,廢除OxyHb誘導(dǎo)的DNA螺旋,并防止OxyHb誘導(dǎo)的PARP裂解。 [4] Z-DEVD-FMK (100 μM)阻斷MPP+誘導(dǎo)的caspase-3酶活性的增加。Z-DEVD-FMK劑量依賴性阻斷6-OHDA誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,IC50 為18 μM。[5] |
激酶實(shí)驗(yàn) |
Caspase 活性測(cè)定 |
Caspase-3 和 caspase-9的活性使用基于熒光的基底測(cè)定。處理后,37℃下,細(xì)胞重新在含有10 mM毛地黃皂苷的裂解緩沖液中(50 mM Tris HCl,1 mM EDTA,和10 mM EGTA) 懸浮20分鐘。上層清夜用熒光底物Ac-DEVD-AFC(對(duì)caspase-3)或Ac-LEHD-AFC(對(duì)caspase-9)在37℃下處理1小時(shí),熒光性在激發(fā)波長(zhǎng)400 nm和發(fā)射波長(zhǎng)505 nm下通過(guò)Gemini XS熒光板閱讀器測(cè)量。 |
細(xì)胞實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞系 |
N27細(xì)胞 |
濃度 |
~50 μM |
孵育時(shí)間 |
24小時(shí) |
方法 |
N27細(xì)胞與100 μM 6-OHDA培育24小時(shí),或與300 μM MPP+培育36小時(shí),在50 μM Z-DEVD-FMK 存在或不存在下,細(xì)胞死亡通過(guò)廣泛用于評(píng)估細(xì)胞活性的MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-3-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) 試驗(yàn)測(cè)定。處理后,37°C下將細(xì)胞在含有0.25 毫克/毫升MTT的無(wú)血清培養(yǎng)基中培育3小時(shí)。從四唑鎓形成的甲瓚在570nm下,以630 nm為參考波長(zhǎng),使用SpectraMax酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定。 |
實(shí)驗(yàn)圖片 |
檢測(cè)方法 |
檢測(cè)指標(biāo) |
實(shí)驗(yàn)圖片 |
PMID |
Western blot |
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