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JIB-04
僅限科研使用
JIB-04
別名: NSC 693627
JIB-04 (NSC 693627)是一種廣譜的選擇性Jumonji histone demethylase抑制劑，無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中對(duì)JARID1A，JMJD2E，JMJD3，JMJD2A，JMJD2B，JMJD2C和JMJD2D的IC50分別是230 nM，340 nM，855 nM，445 nM，435 nM，1100 nM和290 nM。JIB?04還可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
JIB-04 Chemical Structure
CAS: 199596-05-9
產(chǎn)品質(zhì)控
批次：
純度：
99.80%
99.80
JIB-04相關(guān)產(chǎn)品
| 相關(guān)靶點(diǎn) | KDM1 KDM2 KDM3 KDM4 KDM5 KDM6 | 點(diǎn)擊展開(kāi) |
|---|---|---|
| 相關(guān)產(chǎn)品 | GSK J4 HCl SP2509 CPI-455 HCl Iadademstat (ORY-1001) 2HCl GSK-LSD1 2HCl OG-L002 ML324 IOX1 GSK J1 CP2 CPI-455 | 點(diǎn)擊展開(kāi) |
| 相關(guān)化合物庫(kù) | 激酶抑制劑庫(kù) FDA藥物庫(kù) 天然產(chǎn)物庫(kù) 已知活性藥物庫(kù)-I 高選擇性抑制劑庫(kù) | 點(diǎn)擊展開(kāi) |
相關(guān)信號(hào)通路圖
生物活性
| 產(chǎn)品描述 | JIB-04 (NSC 693627)是一種廣譜的選擇性Jumonji histone demethylase抑制劑，無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中對(duì)JARID1A，JMJD2E，JMJD3，JMJD2A，JMJD2B，JMJD2C和JMJD2D的IC50分別是230 nM，340 nM，855 nM，445 nM，435 nM，1100 nM和290 nM。JIB?04還可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 靶點(diǎn) |
|
| 體外研究(In Vitro) | ||||
| 體外研究活性 | JIB-04 以癌癥選擇性的方式引起轉(zhuǎn)錄改變，包括下調(diào)增殖基因，上調(diào)抗增殖/前凋亡基因。JIB-04能夠以IC50低至10 nM的水平阻礙肺癌、前列腺癌細(xì)胞系的增殖，同時(shí)在HBECs和PrSCs/PrECs中產(chǎn)生較少的抗增殖活性。[1] | |||
|---|---|---|---|---|
| 激酶實(shí)驗(yàn) | Jumonji脫甲基酶/脯氨酰羥化酶/LSD1活性檢測(cè) | |||
| 活性JMJD2E氨基酸1-350從E.coli中純化，體外環(huán)境中與α-酮戊二酸，5-10 μM鐵離子，抗壞血酸，組蛋白肽段基質(zhì)一起使用，偶聯(lián)反應(yīng)時(shí)加入甲醛脫氫酶和NAD+來(lái)定量NADH的生成量，或使用Epigentek kit P-3081。組蛋白脫甲基反應(yīng)結(jié)果通過(guò)Western分析來(lái)定量，構(gòu)建His-tagged hJMJ2D氨基酸1-350表達(dá)體系，E.coli表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)Qiagen Ni-NTA瓊脂糖手冊(cè)進(jìn)行純化。蛋白用50 mM TrisHCl pH 7.8+0.3 M NaCl + 10%甘油+200 mM immidazol洗脫，后用20 mM TrisHCl pH 7.4，0.15 M NaCl，0.2 mM PMSF，0.5 mM DTT，8%甘油透析。蛋白分裝，速凍、儲(chǔ)存在-80°C。Western blot中，~1.5 μg酶與0.3 μg H3K9me3基質(zhì)（Active Motif #31213），10 μM (NH4)2Fe(SO4)2，1 mM α-酮戊二酸，2 mM L-抗壞血酸鈉在50 mM pH 7.9溶液中混合，與溶媒或藥物在37°C孵育30min-2hrs。加入SDS loading buffer后，煮沸，樣品在NuPage 4-12% Bis-Tris膠上電泳，轉(zhuǎn)膜，用Upstate #07-523處理硝化纖維素膜以檢測(cè)H3K9me3。H3總信號(hào)是通過(guò)Active Motif #39763和連接IRDye 680的驢抗兔IgG（二抗, LI-COR # 926-32223），在Odyssey Infrared成像系統(tǒng)中獲取圖像。體外IC50檢測(cè)和競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)，100-200 ng純化蛋白與溶媒、JIB-04或類(lèi)似物共孵育，通過(guò)ELISA（H3K9me3去甲基作用：Epigentek kit P-3081，H3K4me3去甲基作用：P-3083，H3K27me3去甲基作用：P-3085）檢測(cè)活性，反應(yīng)液包含50mM Hepes pH 7.5，0.01% Tween 20，120nM (NH4)2Fe(SO4)2，1 mMα-酮戊二酸，2 mM L-抗壞血酸鈉，50ng肽段基質(zhì)。最終酶濃度分別為：206 nM JMJD2A，12 nM JMJD2B，60 nM JMJD2C，90 nM JMJD2D E.coli，30 nM JMJD2D Sf9，30 nM JMJD2E，30 nM Jarid1a，35 nM JMJD3。E.coli表達(dá)的hJMJD2A（氨基酸1-350）純化后以每孔400 ng的量進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)GraphPad Prism軟件計(jì)算IC50和進(jìn)行曲線擬合。需要注意的是在基質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)中， 應(yīng)該使分析處于線性范圍并且不超出ELISA板的結(jié)合能力。細(xì)胞裂解物的H3K9me3脫甲基酶活性的直接測(cè)定：超聲處理細(xì)胞（細(xì)胞接種濃度為2x10E+06/10cm板）或腫瘤PBS勻漿（3x4 sec），等量的蛋白與組蛋白H3K9me3基質(zhì)在反應(yīng)液中37°C孵育2h后，用Epigentek kit P-3081進(jìn)行免疫檢測(cè)。500 ng E.coli表達(dá)的PHD2純化蛋白，溶于40mM Tris pH 7.4，100mM NaCl，20% glycerol，5mM β-mercapto-ethanol，10mM 麥芽糖備用。從HIF-1 ODD分離出的生物素化的肽段固定在親和素包裹的96孔板中。酶與被試藥物在反應(yīng)液（20 mM Tris-Cl pH 7.5，5 mM KCl，1.5 mM MgCl2，2 mM DTT，0.12 μM硫酸亞鐵，0.5 mM戊鄰?fù)猁}，1 mM抗壞血酸）中室溫孵育45min。α-酮戊二酸的競(jìng)爭(zhēng)性類(lèi)似物DMOG作為抑制作用的陽(yáng)性對(duì)照。肽段羥基化是通過(guò)對(duì)羥基化HIF肽表位使用多克隆兔抗體，再加入連接羊抗兔HPR的二抗。EnVision上讀取發(fā)光值。LSD1重組蛋白活性通過(guò)使用Epigentek kit P-3075檢測(cè)。 | ||||
| 細(xì)胞實(shí)驗(yàn) | 細(xì)胞系 | 人肺癌細(xì)胞系(LCa)，原代或非致癌細(xì)胞系HBECs，前列腺癌(PCa)，原代前列腺基質(zhì)細(xì)胞(PrSC)和前列腺上皮細(xì)胞(PrEC)。 | ||
| 濃度 | ~10 μM | |||
| 孵育時(shí)間 | 96小時(shí) | |||
| 方法 | 以每孔1500-3000細(xì)胞接種至96孔板，次日開(kāi)始以遞增濃度的化合物處理細(xì)胞4天后，用MTS標(biāo)準(zhǔn)分析法用Promega’s Cell Titer或Cell Titer-Glo試劑測(cè)試細(xì)胞活性，使用Spectra Max或FlouroStar Omega酶標(biāo)儀讀取490 nm和650 nm的吸光度。每種細(xì)胞系進(jìn)行2-5次獨(dú)立測(cè)試，每次包含4-8個(gè)測(cè)試孔。IC50 通過(guò)DIVISA軟件計(jì)算得到。 |
|||
| 實(shí)驗(yàn)圖片 | 檢測(cè)方法 | 檢測(cè)指標(biāo) | 實(shí)驗(yàn)圖片 | PMID |
| Western blot | H3K9me2 / H3K9me3 / H3K27me3 / H3K4me3 / TIMP1 / ANP αCD133 |
|
30531796 | |
| Immunofluorescence | DNA-PKcs |
|
30355483 | |
| Growth inhibition assay | Cell viability |
|
30237855 | |
| 體內(nèi)研究(In Vivo) | ||
| 體內(nèi)研究活性 | 在兩個(gè)小鼠異種移植模型（H358或A549）中，JIB-04減少腫瘤生長(zhǎng)，降低腫瘤中Jumonji組蛋白脫甲基酶的活性，延長(zhǎng)腫瘤患者生存時(shí)間。[1] | |
|---|---|---|
| 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) | Animal Models | H358或A549小鼠異種移植模型 |
| Dosages | 110 mg/kg (H358，腹腔注射)，55 mg/kg (A549, 灌胃) | |
| Administration | 灌胃或腹腔注射 | |
化學(xué)信息&溶解度
| 分子量 | 308.76 | 分子式 | C17H13ClN4 |
| CAS號(hào) | 199596-05-9 | SDF | Download JIB-04 SDF |
| Smiles | C1=CC=C(C=C1)C(=NNC2=NC=C(C=C2)Cl)C3=CC=CC=N3 | ||
| 儲(chǔ)存條件(自收到貨起) | |||
|
體外溶解度 |
DMSO : 62 mg/mL ( (200.8 mM) ；DMSO吸濕會(huì)降低化合物溶解度，請(qǐng)使用新開(kāi)封DMSO) Water : Insoluble Ethanol : Insoluble |
摩爾濃度計(jì)算器 |
|
體內(nèi)溶解度 現(xiàn)配現(xiàn)用，請(qǐng)按從左到右的順序依次添加，澄清后再加入下一溶劑 |
動(dòng)物體內(nèi)配方計(jì)算器 | ||||
實(shí)驗(yàn)計(jì)算
摩爾濃度計(jì)算器
動(dòng)物體內(nèi)配方計(jì)算器（澄清溶液）
第一步：請(qǐng)輸入基本實(shí)驗(yàn)信息（考慮到實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的損耗，建議多配一只動(dòng)物的藥量）
mg/kg
g
μL
只
第二步：請(qǐng)輸入動(dòng)物體內(nèi)配方組成（配方適用于不溶于水的藥物；不同批次藥物配方比例不同，請(qǐng)聯(lián)系Selleck為您提供正確的澄清溶液配方）
% DMSO
%
% Tween 80
% ddH2O
%DMSO
%
計(jì)算結(jié)果：
工作液濃度： mg/ml；
DMSO母液配制方法： mg 藥物溶于μL DMSO溶液（母液濃度mg/mL，注：如該濃度超過(guò)該批次藥物DMSO溶解度，請(qǐng)先聯(lián)系Selleck）；
體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL PEG300，混勻澄清后加入μL Tween 80，混勻澄清后加入μL ddH2O，混勻澄清。
體內(nèi)配方配制方法：取μL DMSO母液，加入μL Corn oil，混勻澄清。
注意：1. 首先保證母液是澄清的；
2.一定要按照順序依次將溶劑加入，進(jìn)行下一步操作之前必須保證上一步操作得到的是澄清的溶液，可采用渦旋、超聲或水浴加熱等物理方法助溶。
技術(shù)支持
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如果有其他問(wèn)題，請(qǐng)給我們留言。
* 必填項(xiàng)
常見(jiàn)問(wèn)題及建議解決方法
問(wèn)題 1:
Do you have any suggestion for in vivo study please? (Cat. S7281, via injection)
回答：
For IP or sub cutaneous injection, The compound is soluble in 4% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O at 3 mg/ml. But when water added, it turned yellowish green immediately. We are not sure if the compound was still fine in this vehicle. So we tried to use oil. 3mg of this compound dissolves in 40ul of DMSO clearly, and it can be dilute with corn oil at any proportion.
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