Collagenase, Type VII (EC 3.4.24.3) is a collagenase that can be used to induce thalamic hemorrhage^[1].

Collagenase, Type VII 可用于腫瘤、腎、腦、肺上皮和許多其他組織分離。

儲存液配制
1. 向 100 mg 膠原酶中加入 1 mL HBSS（Hank’s 平衡鹽溶液，含 Ca²⁺、Mg²⁺），震蕩使其充分溶解，制備成 100 mg/mL（即 100×）的儲存液；
2. 使用低蛋白結(jié)合性的 0.22 μm 濾膜過濾除菌，立即使用或分裝成小份量，于 -20℃ 到 -5℃ 避光凍存；
3. 使用前在冰上解凍，避免反復(fù)凍融。用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為 1-2 mg/mL，需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。

組織分離
1. 使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成 3-4 mm 大小的組織塊；
2. 利用含 Ca²⁺、Mg²⁺ 的 HBSS 洗滌組織塊數(shù)次；
3. 加入足量的含 Ca²⁺、Mg²⁺ 的 HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4. 于 37℃ 孵育 4-18 h。消化時使用水平搖床以及用 3 mM 的 CaCl₂ 補充消化可以提高消化效率；
5. 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于 37℃ 繼續(xù)孵育，進(jìn)一步消化；
6. 利用不含膠原酶的 HBSS 洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
7. 細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動細(xì)胞計數(shù)器或其他方法計算活細(xì)胞密度；
8. 于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

器官灌注
1. 向 37℃ 預(yù)熱的含 Ca²⁺、Mg²⁺ 的 HBSS 中加入膠原酶，另添加 3 mM 的 CaCl₂ 有助于提高分離效率；
2. 按照已優(yōu)化的速率對相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；
3. 將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于 37℃ 進(jìn)一步孵育。

MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

9001-12-1

固體

Light yellow to light brown

膠原酶VII

Room temperature in continental US; may vary elsewhere.

• [1]. Bai Q, et al. A Novel Endoplasmic Reticulum-Targeted Metal-Organic Framework-Confined Ruthenium (Ru) Nanozyme Regulation of Oxidative Stress for Central Post-Stroke Pain. Adv Healthc Mater. 2024 Jan;13(2):e2302526.  [Content Brief]