背景[1-7]
RIP試劑盒是研究細胞內RNA與蛋白質結合的技術，是了解轉錄后調控網絡動態(tài)過程的有力工具，可應用于研究miRNA調節(jié)靶點、RNA與RBPs（RNA結合蛋白）的互作關系等。用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的RNA結合蛋白，防止非特異性的RNA的結合。IP技術（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA結合蛋白免疫沉淀）主要是運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來，經過分離純化就可以對結合在復合物上的RNA進行q-PCR驗證或者測序分析。
RIP是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術，是了解轉錄后調控網絡動態(tài)過程的有力工具，可以幫助我們發(fā)現(xiàn)miRNA的調節(jié)靶點。免疫沉淀把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來，RNA序列通過Microarray（RIP-chip），定量RT-PCR或高通量測序（RIP-Seq）方法來鑒定。RIP是一種基于抗體的技術，用于定位體內的RNA-蛋白質相互作用。
將所關注的RNA結合蛋白(RBP)與其結合的RNA一起進行免疫沉淀，鑒定結合轉錄RNA（mRNA、非編碼RNA或病毒RNA）?？梢酝ㄟ^實時PCR、微陣列或測序檢測。最近，表觀遺傳學和RNA生物學領域對不同RNA作用和功能的關注大大增加。據觀察，RNA的功能遠不止轉錄和后續(xù)的翻譯。例如，RNA-蛋白質相互作用能夠調控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA潛能的這一新認識帶動了新方法的發(fā)展，使研究人員能夠定位RNA-蛋白質相互作用。RIP是一種研究單個蛋白質和RNA分子間物理結合的實驗方案。
實驗步驟：
1.收集細胞（使用甲醛選擇性處理細胞，體內交聯(lián)蛋白質-RNA復合物）
2.分離細胞核，裂解細胞核沉淀
3.染色質片段化
4.將所關注的RNA結合蛋白(RBP)和結合的RNA一起進行免疫沉淀
5.洗去未結合的物質
6.純化免疫沉淀后RBP上結合的RNA
7.將RNA逆轉錄為cDNA，通過qPCR、微陣列或測序進行分析
產品優(yōu)勢：
1.方便，快速，易于操作。
2.提供優(yōu)化的磁珠，適于沉淀RNA-蛋白復合物。
3.高品質，穩(wěn)定性好。
4.結果重復率高。
5.操作簡單、耗時短、結果客觀準確。
應用[8]
RIP試劑盒可用于轉錄后調控研究、表觀遺傳調控以及炎癥研究、神經生物學、新陳代謝、信號通路、免疫學研究。
例如在RIP、c-FLIP基因在肝癌中的表達意義及其在TRAIL誘導的肝癌細胞凋亡中作用研究中用免疫組化法對實驗組及對照組中c-FLIP和RIP蛋白的表達情況進行檢測。分析RIP和c-FLIP在肝癌組織中的表達與腫瘤的病理學分級和患者臨床分期及復發(fā)遠處轉移之間的相關性。
參考文獻
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