人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝

細(xì)胞復(fù)蘇

將含有1mL人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

細(xì)胞傳代

如果人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞1-2次。

2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

細(xì)胞凍存

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例；

1.人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2.1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3.將要凍存的人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 上下游產(chǎn)品信息

上游原料

下游產(chǎn)品

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 生產(chǎn)廠家

 

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