煙酰胺腺嘌呤二核苷酸性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(縮寫為NAD),也稱為二磷酸吡啶核苷酸(縮寫為DPN),或 輔脫氫酶Ⅰ或輔酶Ⅰ。在哺乳動物體內(nèi)存在氧化型(NAD+)和還原型(NADH)兩種狀態(tài),氧化型 (NAD+)在260nm處具有最大紫外吸收光譜,通過各種脫氨酶,從底物中接受一個氫原子和一個電子,變成還原型(NADH),在340nm處有最大吸收。
β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在氧化還原反應(yīng)中用作輔酶,在ADP核糖基化反應(yīng)中作為ADP核糖部分的供體,也作為第二信使分子環(huán)ADP核糖的前體。β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還充當細菌DNA連接酶和一組稱為sirtuins的酶的底物,這些酶使用NAD+從蛋白質(zhì)中去除乙?;?。
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸參與細胞物質(zhì)代謝、能量合成、細胞DNA修復(fù)等多種生理活動,對機體免疫能力有重要作用。在健康狀態(tài)下,人體內(nèi)煙酰胺腺嘌呤二核苷酸濃度穩(wěn)定,維持各項細胞正常功能。體內(nèi)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸濃度決定了細胞衰老的過程和程度,濃度下降會加速細胞衰老的過程。研究表明,NAD+對缺血手術(shù)引起的腎臟梗死具有保護作用,可以顯著減少血清中尿素氮、肌酐水平;NAD+對缺血手術(shù)引起的腎小管損傷具有保護作用。NAD+(煙酰胺腺嘌呤二核苷酸,Nicotinamideadeninedinucleotide,簡稱NAD+)可以有效保護腎臟缺血引起的腎臟損傷,NAD+在制備防治腎臟缺血性損傷藥物中有重要應(yīng)用價值。
另外,煙酰胺腺嘌呤二核苷酸在制備治療炎性痛藥物中具有一定的應(yīng)用,NAD+通過依賴NAD+的去乙酰化酶SIRT1和SIRT2參與調(diào)節(jié)福爾馬林和完全弗氏佐劑(CFA)誘發(fā)的炎癥痛,而SIRT1和SIRT2通過不同機制參與NAD+對炎癥痛的抑制作用,從而達到對炎性痛具有鎮(zhèn)痛的作用。
CN201511022464.3提出的一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸的制備方法,包括如下步驟:
S1、破碎細胞:將酵母細胞加入鹽酸水溶液中浸泡0.5-2.5h,進行溫差破壁處理 后,用陶瓷膜過濾,取濾液得到清液A;
S2、濃縮:取S1中得到的清液A超濾,取超濾液納濾得到濃縮液B,用鹽酸水溶液調(diào) 節(jié)濃縮液B的pH=2-2.5得到濃縮液C;
S3、洗脫:將S2中得到的濃縮液C過D152樹脂柱,用氨水洗脫,收集洗脫液D,用鹽酸 水溶液調(diào)節(jié)洗脫液D的pH=7-8后,過717樹脂柱,用氯化鉀水溶液洗脫,收集得到綜合液E;
S4、分離:將S3中得到的綜合液E納濾得到濃縮液F;用硝酸水溶液調(diào)節(jié)濃縮液F的 pH=1-3,加丙酮沉淀,離心得到固體G;
S5、純化:將S4中得到固體G加水溶解,過制備色譜,脫鹽,分離,收集分離液,濃縮, 凍干得到煙酰胺腺嘌呤二核苷酸。
化學性質(zhì)
白色粉末,易吸濕,水溶液呈酸性。固體在干燥條件下穩(wěn)定,本品的中性或弱酸性水溶液室溫可保存7天,遇堿和熱加速變質(zhì)、分解。比旋光度[α]
23D-34.8°(1%,水);其水溶液在260nm、340nm波長處有最大吸收。易溶于水,不溶于丙酮等有機溶劑。
用途
是生物體內(nèi)必需的一種輔酶,用于生化研究,臨床診斷,臨床藥物及藥物研究。
用途
參與體內(nèi)的能量代謝和物質(zhì)代謝,有利于細胞的修復(fù)和更新。用于冠心病、心肌炎、白細胞減少等癥的治療。
用途
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸是一種輔酶類藥。臨床上主要用于冠心病的輔助治療,能改善胸悶、心絞痛等癥狀。不良反應(yīng)偶見口干、頭暈、惡心等。
用途
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸是一種轉(zhuǎn)遞質(zhì)子(更準確來說是氫離子)的輔酶,它出現(xiàn)在細胞很多代謝反應(yīng)中。NADH或更準確NADH + H+是它的還原形式。它可以被還原,最多攜帶兩個質(zhì)子(寫為NADH + H+)。NAD+是脫氫酶的輔酶,如乙醇脫氫酶(ADH),用于氧化乙醇。它在糖酵解、糖異生、三羧酸循環(huán)及呼吸鏈中發(fā)揮著不可替代的作用。中間產(chǎn)物會將脫下的氫遞給NAD,使之成為NADH + H+。而NADH + H+則會作為氫的載體,在呼吸鏈中通過化學滲透偶聯(lián)的方式,合成ATP。
在吸光方面,NADH+H+在260nm和340nm處各有一吸收峰,而NAD+則只有260nm一處吸收峰,這是區(qū)別兩者的重要屬性。這同時也是很多代謝試驗中,測量代謝率的物理依據(jù)。NAD在260nm的吸光系數(shù)為1.78*104L /(mol*cm),而NADH在340nm的吸光系數(shù)為6.2*10³ L/(mol*cm)。
生產(chǎn)方法
以酵母為原料制得煙酰胺腺嘌呤二核苷酸
破壁、提取、分離 將新鮮壓榨酵母攪拌下加入等量的沸水,加熱至95℃保溫5min,迅速加入兩倍酵母質(zhì)量的冰塊,過濾,濾餅用水洗滌2次,合并濾液和洗液,加入強堿性季銨I型陰離子交換樹脂201×7(717),攪拌16h,過濾,收集濾液。
新鮮壓榨酵母[沸水、冰塊]→提取液[201×7樹脂]→濾液
吸附、洗脫 濾液用濃鹽酸調(diào)pH=2-2.5,經(jīng)弱酸性丙烯酸系陽離子交換樹脂122柱吸附,用無熱原水洗至流出液澄清為止,再用0.3mol/L氫氧化銨溶液洗脫,當流出液呈淡咖啡色,經(jīng)340nm分光光度計測定吸光度大于0.05時,開始收集,流出液呈淡黃色時停止,得洗脫液。
濾液[pH2-2.5]→吸附物→洗脫液
中和、吸附 將強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂001×7(732)加至洗脫液中,攪拌測pH=5-7,過濾,濾餅用無熱原水洗滌,合并洗液和濾液,加稀氨水調(diào)pH值至7(約15%),再用強堿性季銨I型陰離子交換樹脂201×7 (717)50-60目柱進行吸附,用無熱原水洗至流出液澄清無色為止。
洗脫液[001×7樹脂,氨水,201×7樹脂]→[pH7]吸附物
洗脫、吸附、洗脫 將766型活性炭60-80目柱與201×7樹脂柱串聯(lián),用0.1mol/L氯化鉀溶液洗脫,洗脫液立即流經(jīng)活性炭柱進行吸附,吸附完后解除兩柱串聯(lián),用pH9的無熱原水洗滌,再用pH8的4%乙醇洗滌,最后用無熱原水洗至中性,用體積比為丙酮:乙酸乙酯:水:濃氨水=4:1:5:0.02的混合液洗脫,當洗脫液加3倍丙酮產(chǎn)生白色渾濁時,收集洗脫液。
吸附物[201×7樹脂柱,氯化鉀,766型活性炭]→洗脫液[活性炭柱]吸附物[無熱原水,乙醇]→[洗至中性]吸附物[丙酮,乙酸乙酯,水,濃氨水]→洗脫液
沉淀、干燥 洗脫液在攪拌下加30%-40%硝酸調(diào)pH=2-2.5,過濾,冰庫過夜,過濾,95%的冷丙酮洗滌,真空干燥,得成品。
洗脫液[硝酸]→[pH2-2.5, 0℃]沉淀[丙酮]→[干燥]C0I成品。
生產(chǎn)方法
從鮮酵母提取,步驟如下:新鮮壓榨酵母[破壁,提取]提取液[分離]濾液[一次吸附][洗脫]一次洗脫液[中和][二次吸附][洗脫][三次吸附][洗脫]三次洗脫液[沉淀][過濾][干燥]輔酶I
生產(chǎn)方法
酵母經(jīng)沸水提取,醋酸鉛酸化沉淀得粗品,經(jīng)甲酸型陽離子交換樹脂柱處理,精制而得。
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸
上下游產(chǎn)品信息
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