9068-38-6
中文名稱
反轉(zhuǎn)錄酶
CAS
9068-38-6
更新日期
2023/02/09 16:55:27
常見問題列表
概述
反轉(zhuǎn)錄酶（Reverse transcripatse）是以RNA為模板指導(dǎo)三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA（cDNA）的酶。反轉(zhuǎn)錄酶是一種依賴 RNA 的DNA聚合酶，是反轉(zhuǎn)錄病毒特有的一種酶類，凡是反轉(zhuǎn)錄病毒中均攜帶反轉(zhuǎn)錄酶，通過檢測反轉(zhuǎn)錄酶活性指標可達到監(jiān)測生物制品反轉(zhuǎn)錄病毒污染的目的。我們根據(jù)模板噬菌體 MS2 RNA 設(shè)計引物及探針，建立了檢測反轉(zhuǎn)錄酶活性的實時熒光定量 PCR 分析方法，對生物制品中反轉(zhuǎn)錄酶活性測定具有較高的應(yīng)用價值。哺乳類C型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶和鼠類B型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶都是一條多肽鏈。人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶基因轉(zhuǎn)染，許旺細胞 48 h 后，檢測到人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶 m RNA 和蛋白水平表達明顯。鳥類RNA病毒的反轉(zhuǎn)錄酶則由兩上亞基結(jié)構(gòu)。真核生物中也都分離出具有不同結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄酶。端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶（Telomerase reverse transcriptase，TERT）是端粒酶重要的活性部分。簡介
多反轉(zhuǎn)錄酶都具有多種酶活性，主要包括以下幾種活性 。1、DNA聚合酶活性；以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物，多為色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反轉(zhuǎn)錄酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此沒有校正功能，所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯率比較高 。
2、RNase H活性；由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子，將由RNase H從RNA5′端水解掉RNA分子 。
3、DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性；以反轉(zhuǎn)錄合成的第一條DNA單鏈為模板，以dNTP為底物，再合成第二條DNA分子。
除此之外，有些反轉(zhuǎn)錄酶還有DNA內(nèi)切酶活性，這可能與病毒基因整合到宿主細胞染色體DNA中有關(guān)。反轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)現(xiàn)對于遺傳工程技術(shù)起了很大的推動作用，目前它已成為一種重要的工具酶。用組織細胞提取mRNA并以它為模板，在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，合成出互補的DNA(cDNA)，由此可構(gòu)建出cDNA文庫(cDNa library)，從中篩選特異的目的基因，這是在基因工程技術(shù)中最常用的獲得目的基因的方法。
圖片
反轉(zhuǎn)錄酶凝膠電泳圖。
應(yīng)用
端粒酶（Telomerase）是一種核糖核蛋白聚合酶，其作用是維持染色體末端的端粒 TTAGGG 重復(fù)序列的長度，主要由 TERT 和 RNA 模板構(gòu)成。在正常體細胞中，由于端粒酶活性受到抑制，端粒隨著細胞的分裂而逐漸縮短，從而使體細胞的增殖受到限制；而在腫瘤細胞中，由于端粒酶的持續(xù)表達，腫瘤細胞可以維持端粒的長度并獲得無限增殖的能力。腫瘤細胞中 TERT 基因的上調(diào)涉及多種機制，包括表觀遺傳學(xué)的改變以及含有 TERT基因的位點的擴增。近期新發(fā)現(xiàn)的 TERT 啟動子突變揭示了TERT基因激活的另一全新機制。人 TERT 基因位于染色體 5p15.33，其啟動子區(qū)域是端粒酶，表達最重要的調(diào)控區(qū)域。該啟動子核心區(qū)域由 260 個堿基對組成，其中包括 E-box 結(jié)構(gòu)可與 c-Myc 結(jié)合激活轉(zhuǎn)錄，此外GC-box可與鋅指轉(zhuǎn)錄因子 Sp1 結(jié)合。TERT 基因的轉(zhuǎn)錄受到多種激素、細胞因子及癌基因的調(diào)控，如p53 可以下調(diào) TERT 的轉(zhuǎn)錄。Ets 與端粒酶激活密切相關(guān)，其可以被 EGF、Her2/Nez、Ras、Raf 等刺激。癌基因的激活及抑癌基因的失活誘導(dǎo)TERT 的轉(zhuǎn)錄從而導(dǎo)致細胞永生。此外富含GC區(qū)域還可以通過表觀遺傳方式調(diào)控TERT的表達。進展
隨著對人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶、端粒和端粒酶結(jié)構(gòu)、功能及調(diào)控機制研究的不斷深入，人們對 hTEＲT 在細胞永生化以及腫瘤細胞癌變進程中的作用有了新的認識。端粒對于維持細胞染色體的穩(wěn)定性非常重要，任何原因造成的端粒長度過短均將會引起基因穩(wěn)定性的改變，而基因不穩(wěn)定則會增加惡性腫瘤的發(fā)生率。相信 hTEＲT 將在腫瘤診斷和治療中發(fā)揮更重要的作用。參考文獻
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